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基因工程中筛选阳性克隆子的方法
植物
基因工程的
内容(
基因克隆方法
、连接、转化、
筛选
及鉴定)
答:
1)目的基因制备和分离:一般通过文库筛选、同源序列比对等方法进行克隆
。2)DNA重组载体的构建:选择植物表达载体,根据载体选择或添加酶切位点,然后进行酶切连接,构建重组载体。3)转化:转化方法有多种:农杆菌法:将重组载体用电击或热激的方法将其转入农杆菌中,再用农杆菌侵染植物;基因枪法:将...
基因克隆的
基本步骤有哪些
答:
(2)PCR筛选和限制酶酶切法:提取转化子中的重组DNA分子作模板
,根据目的基因已知的两端序列设计特异引物,通过PCR技术筛选阳性克隆。PCR法筛选出的阳性克隆,用限制性内切酶酶切法进一步鉴定插入片段的大小。(3)
核酸分子杂交法
:制备目的基因特异的核酸探针,通过核酸分子杂交法从众多的转化子中筛选目的克...
如何从
基因
文库
中筛选
目的基因
答:
可以利用基因工程技术来分离目的基因,
大致步骤是:1.从供体中制备高纯度的染色体基因组dna;2.用合适的限制酶把dna切割成若干个片段
;3.将这些片段分别与适当的载体分子进行体外连接;4.重组载体导入受体细胞中或包装成噬菌体,适宜条件下培养;5.观察培养基中的重组菌落或噬菌斑,筛选阳性克隆,再将其...
基因工程的
一道论述题,关于
克隆
表达体内蛋白质。
答:
4.具体步骤 目的片段的获得 根据已知序列设计带酶切位点的
基因
引物,扩增得到该基因序列。连接 将目的片段和原核表达载体分别酶切处理,回收酶切片段。通过连接酶连接。转化 讲构建好的表达载体转化细菌,涂布在特定抗性的平板上。
阳性克隆的筛选
、鉴定 挑取阳性克隆,通过菌落PCR鉴定是否为阳性。目的蛋白...
求助有关
基因工程的
问题
答:
关键在 “起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中”导入质粒后,就算导入率是100%, 但是,转染细菌提取质粒的时候,效率不会是100%,这就要挑取
阳性克隆
(需要标记基因的帮助)。同理,在后面的几步中,只要用到质粒序列插入
方法
的,都需要通过标记基因来
筛选
。另外,标记基因是
基因工程中
必须用到...
如何用pcr技术
克隆
和改造目的
基因
答:
(1)
基因
标鉴法。该法是利用转座子或T-DNA插入植物的基因组中引起某一基因失活产生一些突变体,然后用相应转座子或T-DNA对突变体文库进行
筛选
,以选到的
阳性克隆
片段为探针,再筛选野生型植物因文库分离目的基因。如将一株带有功能的转位因子系统的植物与另一株在遗传上有差异的同种植物杂交,在...
基因工程的
步骤,具体一点
答:
有热激还有电转等
方法
;“增”就是转入了重组质粒载体的宿主细胞增殖培养,通过抗性
基因
或其他
筛选方式筛选
含有目的质粒载体的
阳性
单
克隆
细胞增殖培养;“检”就是检验了,做克隆就是提取质粒之后PCR方法检验目的重组质粒和携带基因正确性,做表达就是通过表达蛋白相应检测方法检测外源基因表达情况,一般情况做...
基因工程的
表达拼接的这个题怎么写呢?
答:
- 将纯化的载体DNA和目标
基因
DNA片段使用连接酶连接在一起,形成重组质粒。5. **转化大肠杆菌 - 将重组质粒通过热激法或其他
方法
转化到大肠杆菌感受态细胞中。6. **
筛选阳性克隆
- 在含抗生素的LB平板上培养大肠杆菌,筛选出成功携带重组质粒的菌落。7. **诱导表达和检测 - 选择阳性克隆,在含IPTG...
说说质粒图谱那些你不知道的事...
答:
图1:质粒——
基因工程的
忠实载体 解读质粒图谱的关键元素 在探索质粒图谱之前,了解其基本构成至关重要。改造过的质粒通常具备复制起点、
筛选
标记和多
克隆
位点这三个核心元件(图2)。复制起点(ori)是启动复制的关键,它决定了质粒在何处启动复制,以及在细胞中的拷贝数量。而筛选标记如氨苄青霉素抗性(...
基因工程
原理:质粒的抗性基因有利于
筛选
重组DNA分子
答:
如果受体细胞是细菌的话,可以挑选单
克隆
,进行菌液PCR。引物设计在抗性
基因中
,看pcr结果是否呈
阳性
,即能p出条带。最准确的,还是酶切鉴定。
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