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如何筛选和鉴定阳性重组子
重组
质粒的
筛选鉴定
答:
酶切鉴定 如同舞台上的灯光,酶切是照亮重组质粒真面目的关键步骤
。通过精心设计的酶切位点,我们可以在电泳图谱中捕捉到预期的片段,如同丝带般清晰。选择酶切位点时,要考虑它们的分布、数目以及切割后片段的大小,确保这些片段在电泳中可清晰分辨。如果克隆策略的插入方向不确定,利用载体和插入序列内部...
DNA
重组
体的
筛选和鉴定
的常用方法有哪几种?
答:
【答案】:DNA重组体的筛选和鉴定的常用方法是:
①抗药性标志选择:可在培养基中加入抗生素予以筛选,未转化的细菌被杀死,已转化的则生成菌落
。②核酸内切酶酶切图谱分析:
利用核酸内切酶切割重组体,然后电泳检测
进一步确定重组体是否含有目的基因。③分子杂交法:可把待选菌在平板上培养成菌落,用硝酸纤维...
dna
重组子
的
筛选鉴定
有哪些步骤
答:
DNA
重组
技术步骤如下:一、质粒DNA 提取的pQE-31和pUC18-CAT 质粒。二、制备重组DNA 在灭菌的1.5mL 离心管中,加入pQE-31质粒10mL(2mg/mL),2mL酶切缓冲液,1mL BamHI 和HindIII酶 的混合液(各含10个单位),无菌双蒸水7mL,至反应混合物总体积为20mL,离心混匀,37℃反应过夜。2. 在另一...
如何筛选
含有
重组
体的
阳性
菌落
答:
重组体一般会带有标志基因(报告基因)如抗青霉素,抗赤霉素,荧光蛋白等
,可通过在培养基内加入相应的抗生素来淘汰掉没有发生重组的细菌,或通过其他手段挑取目的菌落(荧光蛋白可在紫光灯下挑取)
重组子
的重组子 - 重组子的
筛选
答:
这和受体菌:质粒DNA的选择相关, 原则上要注意: 1、 受体菌必须是限制与修饰系统缺陷的菌株; 2、 根据质粒基因型和受体菌基因型互补原则而定;
重组子
的
筛选
方法常用的有两种方法: 1、 抗生素筛选法:菌株为某种抗生缺陷型, 而质粒上带有该抗性基因(如氨苄青霉素, 卡拉霉素等)这样只有转化子才...
电泳法
筛选重组子
的原理
答:
电泳法
筛选重组子
的原理是利用电泳技术将基因重组片段从其他DNA片段中分离出来。根据查询相关公开信息显示,电泳过程中,每个DNA片段在电压作用下在电泳胶中移动,并根据其尺寸大小,分别向正电压方向或负电压方向移动,从而实现对DNA片段的精确分离。
3种基因文库的构建中对
重组子
的
筛选
方法并简述其原理
答:
1 抗性
筛选
。利用培养基中的药物进行筛选。
重组子
可获得抗性。2 影印筛选。利用核酸探针对具有目的DNA片段的宿主进行筛选。3 营养缺陷筛选。宿主是营养缺陷型,重组子可使宿主获得营养补偿能力,从而起到筛选效果。
重组
DNA可以从哪几个方面进行
筛选和鉴定
答:
第一:可以在
重组
的DNA中提前插入一个标记基因,一般是抗·抗生素基因(抗四环素、抗链霉素···),那么如果目的基因的插入点在一个标记基因中的话,观察那个标记基因的表达.第二:DNA探针 第三:抗原抗体杂交技术 第四:直接检查产物
怎样
用营养缺陷型
筛选重组子
与非重组子
答:
该
筛选
方法如下:1、突变型受体细胞上缺乏合成某种必需营养物质,而载体分子上携带了这种营养物质的生物合成基因,利用缺少该营养物质的合成培养基进行涂布培养时,
阳性
转化子能够长出菌落。2、已经诱变产生的合成Lys的缺陷型菌株为受体细胞,当载体分子上含有Lys合成基因时,转化后利用不含Lys(即Lys-)的...
筛选阳性
克隆的方法和原理?
答:
最常见的就是蓝白斑
筛选
,详细的楼主可参考这个http://baike.baidu.com/view/161221.htm 方法很多,除蓝白斑筛选外,像 菌落PCR验证:详见http://baike.baidu.com/view/4118663.htm 从细菌里提取质粒后双酶切验证:用构建重组质粒时的两种限制性酶进行酶切,电泳,观察条带是否
和重组
之前,目的基因...
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