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如何计算酶切反应体系用量
要配置多少的
酶切体系
,载体和插入DNA的量要加多少?
答:
因为内切酶的酶活性单位定义是在50ul
反应体系
中,最适温度反应1小时能够讲1ugDNA完全
酶切
的酶量.所以,一般在酶切体系里,DNA的量是可以加到非常大的.因为考虑到后期的纯化后DNA的损失问题,所以推荐酶切体系中的DNA尽量多加一些.这样你纯化回收后的DNA剩下的就比较多,有利于后期的连接以及筛选.具体的话...
酶切反应体系
里,总得要求是20ul,现在已知底物DNA为,200ng/ul,有10ul...
答:
首先是10×的缓冲液,配制20ul,则需要2ul缓冲液 其次是酶,一般用0.5-1ul
,看具体的实验情况吧。DNA的话,你做的是酶切鉴定还是酶切回收还是什么,这个会决定你所加的底物的量。最后加水补齐20ul。
在XhoⅠ和XbaⅠ限制性内切酶双
酶切体系
中,
反应体系
是什么?或者这两种酶...
答:
你可以在内切酶公司网站上查到推荐的
反应体系
:从图上看,这两个酶在不能再另一个酶的推荐buffer中使用,只能用2X Tango buffer进行双
酶切
,而从酶活性上来看,XbaI在2X Tango中,活性50-100%,而XhoI则是100%,所以如果两个酶要调整
用量
的话,XbaI需要是XhoI用量的2倍,但就是酶总量不能超过总体...
酶切体系
答:
1.是2*10 2.分别是50/10=5,50/5=10,50/2=25
。一般来说几×就是对buffer稀释几倍。
配置
酶切体系
时,为什么限制性内切酶的
用量
不超过整个体系的1/10?
答:
限制性内切酶是一种特殊的酶,它可以切割DNA分子的特定位置,并在这些位置形成切口,从而帮助进行DNA重组和操作。在配置
酶切体系
时,限制性内切酶的
用量
应该控制在适当的范围内,通常不超过整个体系的1/10。这是由于以下几个原因:1、限制性内切酶作为酶,其本身也具有催化效应。如果使用过多的限制性内切酶...
双
酶切
的20μL
反应体系
和反应时间
如何
确定?最好是说明原理。所用的...
答:
5ul 酶2 0.5ul buffer 去Takara产品目录查双
酶切
buffer表,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以。有个别酶需要55度。注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性。
反应体系
中甘油浓度要小于1%,而酶是储存在50%甘油中。
将质粒进行
酶切
时
如何
确定酶的
用量
?
答:
对质粒DNA
酶切反应
而言, 限制性内切
酶用量
可按标准
体系
1μg DNA加1单位酶,消化1-2小时。
takara公司的EcoR1和Not1 50μl双
酶切反应体系
的配制?
答:
酶各加1.5 ul,底物加入在2ug,37℃,1*H Buffer+BSA,
酶切
12小时。
酶切体系
对质粒DNA浓度,buffer缓冲液,酶量有什么要求
答:
酶切(酶切割或
酶切反应
)是分子生物学实验中常用的方法,通常涉及到使用特定的酶来切割DNA或RNA分子。在酶切
体系
中,确保以下因素是合适的非常重要:1. **DNA浓度**:DNA浓度通常需要在合理的范围内,以确保酶切反应的有效性。通常来说,DNA的浓度应在25 ng/µL到500 ng/µL之间,...
20ul双
酶切体系
和10ul双酶切体系的区别
答:
2、DNA
反应
量不同 20ul双
酶切体系
所含DNA要比10ul双酶切体系含有的DNA多,进行双酶切时所要切的DNA量也不同。研究中常用的双酶切体系就是20ul双酶切体系和10ul双酶切体系,二者除了调配比例之外,所用的酶是相同的,所以反应温度,酶切时间等等都差不多。只有在需要回收用于连接的时候才选取50ul...
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