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核酸探针的种类及常用的标记方法
探针有哪些类型
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探针标记有哪些方法
答:
探针标记方法有:随机引物标记、切口平移法、末端标记法
。切口平移是切口产生3'羟基和5'磷酸基团,DNA延伸合成3'端,5'端被小片段降解,缺口位点沿着双链向3'端移动,是在体外向DNA分子引入放射性标记核苷酸的技术。随机引物合成是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成
DNA探针
。末端标记...
分子杂交技术的
核酸探针标记法
答:
核酸探针根据核酸的性质,
可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物的与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针
;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种类型的探针及标记方法。 分子生物研究中,最常用的探针即为双链DNA探针,它广...
核酸的标记
物
有哪些
答:
核酸标记物有以下几类
1.核素标记物 放射性核素是目前应用最多的一类探针标记物
。放射性核素的灵敏度极高,可以检测到10-14~10-18克的物质,在最适条件下可以测出样品中少于1000个分子的核酸含量。常用标记核酸探针的核素有32P、3H、35S,在Southern印迹杂交中以“P最常用。还应根据标记方法的不同选...
核酸探针的标记
答:
常将放射性同位素如32 P连接到某种脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)上做为标记物,然后通过切口平移法标记探针
。切口平移法(nick translation)是利用大肠杆菌DNA聚合酶I (E.coli DNA polymerase I) 的多种酶促活性将标记的dNTP掺入到新形成的DNA链中去,形成均匀标记的高比活DNA探针。其操作方法如下:⑴...
DNA探针
简介
答:
DNA探针
(包括cDNA探针)的主要优点有下面三点:①这类探针多克隆在质粒载体中,可以无限繁殖,取之不尽,制备方法简便。②DNA探针不易降解(相对RNA而言),一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探针的标记方法较成熟,有多种方法可供选择,如缺口平移,随机引物法,PCR标记法等,能用于同位素和非同位素标记。
核酸探针
加
标记
的作用
答:
标记方法有荧光标记法、生物素标记法、同位素标记法等。常用的有以下几种方法制备和标记探针:将纯化的样品RNA通过特定的引物逆转录合成单链
cDNA探针
,在合成的过程中掺入标记物;或者先将待测样品的RNA转录合成cDNA,再进一步通过加入标记物进行体外转录合成cRNA单链探针,又或者将合成的cDNA加标记物和特殊...
原位杂交组织化学技术的二、
核酸探针的
应用
答:
1.按所带标记物,探针可分为同位素
标记探针和
非同位素标记探针两大类。目前,大多数放射性
标记法
是通过酶促反应将标记的基因掺入DNA中,
常用的
同位素标记物有3H、35S和32P。同位素标记物虽然有灵敏性高,背景较为清晰等优点,但是由于放射性同位素对人和环境均会造成伤害,近来有被非同位素取代的趋势。非...
Southern blotting是什么?
答:
然后是核酸印迹(就是把凝胶上的DNA原位不动的印迹到一张可以吸附DNA的膜上,
常见的
有尼龙膜、硝酸纤维素膜等),印迹的
方式
有一些不同,最经典的是采用虹吸印迹。然后通过紫外交联或者120℃烘烤30分钟的
方法
将核酸固定。然后用
核酸探针
去杂交这张膜。然后杂交完毕后就是显色的步骤了(根据探针上面
标记
...
常见
于
标记核酸探针的
放射性核素有?
答:
核酸标记物有以下几类
1.核素标记物
放射性核素
是目前应用最多的一类探针标记物.放射性核素的灵敏度极高,可以检测到10-14~10-18克的物质,在最适条件下可以测出样品中少于1000个分子的核酸含量.常用标记核酸探针的核素有32P、3H、35S,在Southern印迹杂交中以“P最常用.还应根据标记方法的不同选择...
基因
探针有哪些种类
,
有什么
作用?
答:
②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因,也可以仅仅是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆(molecular cloning)获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组
DNA探针
进,应先制备...
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用于标记核酸探针的放射性核素
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与核酸探针的标记无关的是
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