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血红蛋白的凝胶过滤进行溶胀
血红蛋白凝胶过滤
层析所需仪器、用具、物品和实验的具体方案
答:
本实验就是通过
凝胶过滤
,用还原剂FeSO4处理
血红蛋白
。即首先在层析柱中加入含有还原剂的溶液,使形成一个还原区带,当血红蛋白样品(血红蛋白与铁氰化钾的混合液)流经还原区带时,褐色的高铁血红蛋白立即生成紫色的还原型血红蛋白,随着还原型血红蛋白继续下移,与缓冲液中的氧分子结合又形成了鲜红的血红...
蛋白质的
分离方法有哪些?它们各依据蛋白质的什么性质或特点?
答:
蛋白质
在用盐析沉淀分离后,需要将蛋白质中的盐除去,常用的办法是透析,即把蛋白质溶液装入秀析袋内(常用的是玻璃纸),用缓冲液
进行
透析,并不断的更换缓冲液,因透析所需时间较长,所以最好在低温中进行.此外也可用葡萄糖
凝胶
G-25或G-50过柱的办法除盐,所用的时间就比较短. 2、等电点沉淀法 蛋白质在静电状态...
凝胶过滤
层析的使用方法
答:
自然
溶胀
费时较长,加热可使溶胀加速,即在沸水浴中将湿
凝胶
浆逐渐升温至近沸,1-2小时即可达到凝胶的充分胀溶。加热法既可节省时间又可消毒。凝胶的装填:将层析柱与地面垂直固定在架子上,下端流出口用夹子夹紧,柱顶可安装一个带有搅拌装置的较大容器,柱内充满洗脱液,将凝胶调成较稀薄的浆头液...
为什么
凝胶过滤
层析柱会漏水?
答:
凝胶过滤
层析法又称排阻层析或分子筛方法,主要是根据
蛋白质的
大小和形状,即蛋白质的质量
进行
分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质,使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。也叫做分子排阻层析(molecular-exclusion chromatography)。
凝胶过滤
层析中线性和球状的区别
答:
凝胶过滤
层析中线性和球状的区别是不同的溶质因不同程度进入介质而在液相中停留的时间不同,凝胶的孔径和溶质分子不同。
蛋白
在
凝胶
上移动速度为什么跟分子量有关
答:
这个和
凝胶过滤
的介质结构有关,凝胶填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖如葡聚糖或琼脂糖类物质。当小分子物质能进入其内部,流下时路程较长,而大分子物质却被排除在外部,下来的路程短,所以
蛋白
在凝胶上移动速度跟分子量有关系。
求解:
蛋白
纯化中结晶的常用哪几种方法?他们的使用优势和劣势?_百度...
答:
选择合适的有机溶剂浓度。(四)样品的进一步分离纯化 用等电点沉淀法、盐析法所得到的
蛋白质
一般含有其他蛋白质杂质,须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有:
凝胶过滤
层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。
如何制作气
凝胶
答:
一] 使用最通用
的凝胶过滤
方法,选择分离范围广阔的介质如Superose、Sephacryl HR依据分子量将 样品分成不同组份。 二] 用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标
蛋白的
底物、受体等自制亲和介质,再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。 三] 体积大的样品,往往使用离子交换...
离子交换层析的具体操作
答:
柱子装好后再用起始缓冲液淋洗,直至达到充分平衡方可使用。 加样:层析所用的样品应与起始缓冲液有相同的pH和离子强度,所选定的pH值应落在交换剂与被结合物有相反电荷的范围,同时要注意离子强度应低,可用透析、
凝胶过滤
或稀释法达此目的。样品中的不溶物应在透析后或凝胶过滤前,以离心法除去。为...
常用
蛋白质
沉淀方法有哪些?有哪些应用实例?求答案
答:
1. 机械破碎法 这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎。常用设备有,高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。2. 渗透破碎法 这种方法是在低渗条件使细胞
溶胀
而破碎。3. 反复冻融法 生物组织经冻结后,细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便,但要注意那些对温度变化敏感的
蛋白质
不宜采用此...
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