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DNA链连接酶能以什么为底物
如何提高
DNA
片段的转化率
答:
基本的亚克隆操作包含四步:首先用合适的限制性内切酶切割载体与插入片段,接着用T4
DNA连接酶
将DNA片段与载体连接,然后转化宿主大肠杆菌,最后筛选出含有所需结构的重组质粒。连接仅仅包含两段线型DNA分子的连接,通常形成环状的重组分子。当载体与插入片段具有同样黏性末端时,插入片段以相等的比例形成插入方向相反的两种重组...
简述
DNA
和RNA
连接酶
的催化反应机制。
答:
【答案】:所有已发现的
DNA连接酶
以及RNA连接酶在作用过程中都形成两种以共价键相接的中间产物,即①酶与AMP的络合物(E-A);②
底物
与AMP的络合物(DNA-A)。催化反应分三步进行:(1)酶-核苷酸中间产物的形成:将NAD或ATP的腺苷酰基团转到连接酶的赖氨酸残基的ε-NH2上形成酶一核苷酸中间产物。如果辅助...
如何将PCR片段转移到载体多克隆位点之间
答:
DNA连接酶
有两种:T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能,而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性,即能使两个平末端的双
链DNA
分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接率低,一般可通过提高T4噬菌体DNA...
酶
切失败的原因
答:
它是可以将外来的DNA切断的酶,即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力,但对自己的DNA却无损害作用,这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的,故名限制性内切酶。DNA
连接酶
是1967年在三个实验室同时发现的。它是一种封闭
DNA链
上缺口酶,借助ATP或NAD水解提供的能量催化...
基因的平头末端要怎样
连接
?
答:
Tsubscript4subscript:
DNA连接酶
既可催化DNA黏性末端的连接,也能催化DNA平头末端的连接,前者在退火条件下属于分子内的作用,而后者则为分子间的反应。从分子反应动力学的角度讲,后者反应更为复杂,且速度也慢得多,因为一个平头末端的5′-P或3′-OH与另一个平头末端的3′-OH和5′-P同时相遇的...
酶
的生物催化作用是
什么
意思??
答:
酶
是一种催化剂,相比无机催化剂,酶具有专一性和高效性的特点。生物体内的生化反应基本上是在酶的催化下进行的。
耐热菌的基因克隆
答:
1896年,W·Kuhne首先把这类物质称为"enzyme",中文译为"
酶
"。1897年Buchner成功地用不含细胞的酵母液实现发酵,说明具有发酵作用的物质存在于细胞内,并不依赖活细胞。1926年Sumner首次提取出脲酶,并进行结晶,提出酶的本质是蛋白质,并几乎要参与所有的生命活动过程。1982年以后陆续发现某些RNA和
DNA
也...
蛋白质经泛素-蛋白
酶
体降解研究基本思路(图文详解)
答:
因此,需要确认
底物
蛋白质的泛素
链为
K48链。将泛素分子赖氨酸单位点突变(见图21)或泛素分子单赖氨酸保留突变(见图23),通过免疫沉淀和免疫印迹的方法检测底物蛋白质泛素化的种类,见图22和图24。通过过表达(图25)或敲低(图26)E3泛素
连接酶
的方式检测底物蛋白质泛素化水平的改变。体外泛素化能够...
酶
的分类
答:
异构酶类(isomerases)催化各种同分异构体、几何异构体或光学异构体之间相互转化的酶类。例如,异构酶、表构酶、消旋酶等。
合成酶
类(ligase)催化两分子
底物
合成为一分子化合物,同时偶联有ATP的磷酸键断裂释能的酶类。例如,谷氨酰胺合成酶、
DNA连接酶
、氨基酸:tRNA连接酶以及依赖生物素的羧化酶等。
酶
促反应降低活化能的能量的来源是
什么
?
答:
5、异构酶类(isomerases)催化各种同分异构体、几何异构体或光学异构体之间相互转化的酶类。例如,异构酶、表构酶、消旋酶等。6、
合成酶
类(ligase)催化两分子
底物
合成为一分子化合物,同时偶联有ATP的磷酸键断裂释能的酶类。例如,谷氨酰胺合成酶、
DNA连接酶
、氨基酸:tRNA连接酶以及依赖生物素的羧...
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