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pcr延伸温度怎么确定
如何确定pcr
反应中的退火
温度
和延长时间
答:
1、退火
温度
低于引物Tm值5 ℃左右,一般在45~55℃。退火温度需要从多方面去决定,一般根据引物的Tm值(Tm值=4(G+C) +2(A+T))为参考,根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对
PCR的
特异性有较大影响。2、
延伸
时间:1min/kb(10kb内)。引物延伸一般在72...
PCR
反应
温度怎么
设置?
答:
1、变性反应
温度
的设置 当温度控制在90 °C以上时DNA会发生变性,双链DNA解链成单链。2、退火反应温度的设置 当温度下降到50 °C的时候,DNA复性,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。3、扩增反应温度的设置 当温度上升到72 °C左右时
延伸
,DNA 聚合酶在此时有最大活性,能够催化4 种脱氧...
为什么在
PCR
反应过程中,使用三个不同的
温度
变化
答:
第一个一般在94-95度左右,叫做变性,就是通过加热打开双链.第二个温度点叫做退火
,根据引物的TM算出,一般比TM低5度,有利于引物的结合.第三个温度叫做延伸,一般采用72度.是引物结合后DNA聚合酶按照模板合成新的链.一分钟一千个碱基对.如此循环.现在很多PCR都采用2部法,由于采用了不同的DNA聚合酶(...
PCR
复性
温度如何确定
答:
延伸温度根据你使用的Taq来确定就好了
,一般都在70度上下,嫌麻烦就定个70度长期使用。你买的taq的说明书上会给你建议的温度。退火的温度定在55度就ok了,万年不变也没有关系, 50度到60度都差不多。这个说明书也会给。变性95度上下几乎万年不变。最后延伸是为了把没有延伸完的片段(如果有)补全...
PCR的延伸温度
一般在什么范围之内
答:
反应的
延伸温度
一般选择在七十至七十五摄氏度之间,常用温度为七十二摄氏度。过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。是指聚合酶链式反应,是扩增的一种方法,实验中很常用。包括高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应。延伸时间应该保证聚合酶可以完成扩增长度。另外一个考量是总延伸时间,也就是单位循环的...
pcr
变性退火
延伸
的定义
答:
94℃左右)双链间的氢键断裂而形成两条单链。退火;使溶液
温度
降至50~60℃,模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合。
延伸
:溶液反应温度升至72℃,耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板,在引物的引导下,利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸(dNTP),按5'一3’方向复制出互补DNA。
你进行一个
PCR
反应用
怎样
的
温度
?
答:
【答案】:
PCR
一般以3种不同的
温度
进行。第一步,模板DNA变性,95℃温育1分钟。第二步,退火,使反应冷却下来以使引物与模板结合,这一步的精确温度由引物的融合温度决定,即引物能够与模板稳定结合的最高温度,一般为55℃,这依赖于引物的长度(引物越长、G+C含量越高,融合温度越高)。一般来说,...
PCR
技术的三个重要步骤是?
答:
三步是:变性(将DNA加热到90-95度)、复性(将DNA降温至55-60度)、
延伸
(将DNA升温到70-75度)❤您的问题已经被解答~~(>^ω^<)喵 如果采纳的话,我是很开心的哟(~ o ~)~zZ
什么是
pcr延伸
答:
标准的
PCR
过程分为三步: 1.DNA变性(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA。 2.退火(复性)(25℃-65℃):系统
温度
降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。 3.
延伸
(68℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3...
做
pcr
,
如何确定
最佳退火及
延伸
的时间和
温度
答:
根据你用的聚合酶的性质
确定延伸
时间,根据引物特性确定退火
温度
!如果你有梯度
PCR的
话最好摸索几个温度看看哪个温度最好!
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