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t4dna连接酶连接什么末端效率高
T4 DNA连接酶
催化的连接反应的能量来源是?
答:
T4 DNA连接酶由一条多肽链组成,分子量为6800,
通常催化粘性末端间的连接效率要比催化平末端连接效率为高
。催化反应需要Mg2+和ATP,ATP作为反应的能量来源。这个网页介绍了几种DNA连接酶,建议参考一下。不过这个网页已经打不开了,但是可以在百度里搜索上面这个句子,或者我发这个网页快照给你吧。http:/...
DNA连接酶
的分类
答:
粘末端连接效率较高
,加入0.2~1mlT4DNALigase,可在室温或16℃反应1~3小时完成反应;平末端连接效率较低,加入1mlT4DNALigase,通常需要在16℃或4℃过夜完成反应。注意事项1)10xLigationBuffer含有ATP,使用前应在室温放置至融化或用手掌温度辅助融化,然后置于冰上。不要加热融化以免ATP降解。2)T4DNAL...
生物基因工程为
什么
总是说粘性
末端
,而不说平末端?
答:
T4DNA连接酶可以连接平末端
但是平末端相对来说连接效果没有
粘性末端
好 如果两个平末端是用同种限制酶切割 也就是核苷酸序列反向对称 连接的效果好一些 如果两个平末端不一样 接就是核苷酸序列不反向对称 不太可能连接上
限制性内切酶可以
连接DNA
的
末端
吗?
答:
则可用适当的酶将DNA突出的末端削平或补齐成平末端,再用T4DNA连接酶连接,
但平末端连接要比粘性末端连接的效率低得多
。在分子生物学的研究中,DNA末端的连接是一极为常用的基本操作,可分为粘末端和平末端连接,粘末端连接效率相对较高,平末端的连接效率一般非常低, 但平末端连接具有普适性,被广泛...
E.coli连接酶与
T4连接酶
的区别
答:
E.coli只连接
粘性末端
T4可以连接平末端和粘性末端
在DNA重组克隆实验中为
什么
通常使用
T4DNA连接酶
答:
DNA连接酶有两种:大肠杆菌DNA连接酶和T4 DNA连接酶 大肠杆菌DNA连接酶需要 NAD+,只能连接
粘性末端
,不能连接平末端(后来研究发现也可以连接平末端,效率中等)T4 DNA连接酶需要ATP,能连接粘性末端和平末端。连接RNA-DNA杂交双链上DNA链缺口
...一样可以连接
粘性末端
,好像比
DNA连接酶
厉害的感觉,为
什么
通常都用DNA...
答:
T4连接酶属于
DNA连接酶
的一种, 即DNA连接酶是一种大类,
T4连接
酶是从T4噬菌体中提取出来的一种具有链接DNA功能的DNA连接酶。就好比是限制性内切酶和各种各样限制性内切酶的区别一样
T4DNA连接酶
的作用机制
答:
T4DNA连接酶连接要求和结果 外源DNA末端性质 连接要求 连接结果
不对称粘性末端
两种限制酶消化后,需纯化载体以提高连接效率 载体与外源DNA连接处的限制酶切位点常可保留;非重组克隆的背景较低;外源DNA可以定向插入到载体中。 对称性粘性末端 线形载体DNA常需磷酸酶脱磷处理 载体与外源...
T4DNA连接酶
的基本特性
答:
噬菌体T4DNA连接酶分子也是一条多肽链,分子量为60KD,其活性很容易被0.2mol/L的KCl和精胺所抑制。此酶的催化过程需要ATP辅助。T4DNA连接酶可连接DNA-DNA,DNA-RNA,RNA-RNA和双链DNA
粘性末端
或平头末端。另外,NH4C1可以提高在大肠杆菌DNA连接酶的的催化速率,而对T4DNA连接酶则无效。无论是T4DNA...
DNA
分子的
连接
方法有
哪些
?
答:
1、平末端法,有些核酸内切酶切出的DNA分子是平末端,对DNA分子的单链末端亦可用核酸酶S1或DNA聚合酶Ⅰ来修平或补齐,然后用T4 DNA连接酶将不同片段连接起来。该法形成重组DNA分子的效率低,只及
粘性末端
法的1%。2、人工接头法,1976年发展起来的。首先用化学法合成具有某种限制性内切酶识别位点的序列...
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