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wb封闭过夜算过度封闭
western blot会出现
封闭过度
吗
答:
western blot一般
是
不会出现
封闭过度
的 western blot封闭的目的是将PVDF膜上无蛋白的部分空隙用奶粉填满,以免孵抗体的时候一抗二抗与之结合,产生非特异条带或者是背景杂乱。为封闭掉膜上无蛋白区域的非特异结合位点,封闭时间长点是没关系。但时间太长会造成封闭试剂的变性,影响结果。
...里可见整张膜都发光,
是
为什么呀???膜用百分之五的BSA
封闭过夜
...
答:
如果整张膜都发光,压片后胶片上没有条带,整个一片都是黑乎乎的,应该是曝光过度了,和封闭没有太大关系
。建议改进方法:降低上样量、降低一抗或二抗浓度、降低抗体孵育时间、改用效果不那么强的发光液(如果只有一种发光液,可以将其用水稀释后再用),总之使用一切能减少曝光强度的方法。整张膜都...
...里可见整张膜都发光,
是
为什么呀???膜用百分之五的BSA
封闭过夜
...
答:
如果整张膜都发光,压片后胶片上没有条带,整个一片都是黑乎乎的,应该是曝光过度了,和封闭没有太大关系
。建议改进方法:降低上样量、降低一抗或二抗浓度、降低抗体孵育时间、改用效果不那么强的发光液(如果只有一种发光液,可以将其用水稀释后再用),总之使用一切能减少曝光强度的方法。整张膜都...
如何配制
封闭
液,怎么使用?
答:
3) 封闭时间:室温1-2h、4度
过夜
或37度半小时 4) 封闭液pH:一般5%脱脂牛奶pH大约为6.0-6.5左右,而1%脱脂牛奶可能6.5-7,好像RD公司的
WB
-Protocol中要求封闭液和稀释抗体的封闭液需要调pH至7.4;但是大多数抗体不调pH也可以做出来 5) 个人经验:5%脱脂牛奶封闭效果最佳,但有时也可能
封闭
...
western没
封闭
好有什么后果
答:
未能完全
封闭
膜上的非特异性位点会导致一抗或二抗结合到膜上,产生非特异性结合,造成高背景。如封闭液未能充分洗涤掉膜上的非特异性结合物,会导致高背景。如在显色过程中未及时终止反应,会导致显色
过度
,影响膜的清晰度和辨识度。抗体稀释度不当也会影响实验结果,过高或过低的稀释度会导致非特异性...
WB
加完发光液暗室里可见整张膜都发光,是为什么
答:
如果整张膜都发光,压片后胶片上没有条带,整个一片都
是
黑乎乎的,应该是曝光
过度
了,和
封闭
没有太大关系.建议改进方法:降低上样量、降低一抗或二抗浓度、降低抗体孵育时间、改用效果不那么强的发光液(如果只有一种发光液,可以将其用水稀释后再用),总之使用一切能减少曝光强度的方法.整张膜都发光的...
wb
背景很高跟组织制样有关系吗
答:
有关系。
WB
实验检测结果背景过高可能是由很多因素引起的:
封闭
不好、显色
过度
、洗涤不充分、转移缓冲液或设备有污染、抗体稀释度不对或抗体不纯。核酸与蛋白结合阻碍聚集,银染或WB背景过高等问题,所以需尽量去除杂质。
史上不一定最全之
WB
蛋白免疫印迹经验分享
答:
在操作上,
WB
显色方法有放射自显影、化学发光ECL、荧光ECF和DAB呈色等。最常见的可能是化学发光ECL,它使用标记的二抗和特定试剂,通过化学反应产生信号。操作步骤包括样品准备、蛋白提取、含量测定、蛋白变性、SDS-PAGE电泳、转膜、
封闭
和抗体孵育等,每一步骤都需要精心把控。在实践中,可能会遇到一些问题...
wb
实验的原理和步骤
答:
封闭
与杂交 1.用25mlTBS洗膜5min,室温,摇动。 2.置膜于25ml封闭缓冲液中1h,室温,摇动。 3.15mlTBS/T洗3次(5min/T)。 4.加入合适稀释度的一抗,室温孵育1-2h或4°C
过夜
,缓慢摇动。 5.15mlTBS/T洗3次(5min/T)。 6.加入合适稀释度的碱性磷酸酶(AP)或辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗,室温孵育1h,缓慢摇...
君忘是什么动画
答:
唯一不变的
是
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过夜
的亲密关系。 岁月会改变一个人, 但是…不变的美貌仍然在病房中停留不去...
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