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western blot
wb是看颜色深浅还是条带宽窄
答:
Western
blot
(WB)的灰度值分析是一种半定量方法,用于显示蛋白丰度的相对变化。这种分析通过比较样本中目标蛋白与其他样本(如对照组或模型组)的信号强度来确定目标蛋白表达量的增加或减少。在WB条带定量中,常用的两种方法是灰度分析和光密度分析。使用ImageJ软件进行WB灰度值分析的具体步骤如下:1. ...
westernblot
蛋白的移动方向
答:
将蛋白质转移到膜上。
westernblot
免疫印迹是将是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质,从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。westernblot现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
western
-
blot
实验影响因素有哪些?
答:
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量,蛋白变性是否充分等等,还有,蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外,蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。2.凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高,分离胶的PH值应在8.8左右,而浓缩胶...
凝胶酶谱和
western
blot
的区别?
答:
条带的强弱与MMP-2 和MMP-9 活性成正比。 复性原理:在电泳过程中,SDS 与样品中的MMPs 结合(当然是可逆性结合),破坏其氢键、疏水键而使MMPs 不能发挥其分解明胶的作用,而只有当将胶置 Trition 中洗脱(最好是放在摇床上摇,30min/次,做2 次或15min/次,4 次。而
western
blot
采用的是...
在
western
blot
中loading buffer的作用是什么?
答:
1、指示剂,方便观察电泳进行的程度;2、密度大,携带你的样本沉到孔的底部;3、保持蛋白线性及携带过量负电荷的状态。除此之外,里面最重要的是还有巯基乙醇还原剂来让蛋白质充分变性,同时保护-sh基团。
免疫印迹与elisa和
western
blot
有什么区别,似乎原理差别不大,谁能细致...
答:
酶联免疫吸附实验(ELISA) ,蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即
Western
Blot
,二者在原理上、应用上有区别,具体如下:1、原理不同 蛋白质印迹法,其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息...
western
blot
转膜是怎么做的?
答:
蛋白免疫印迹(
Western
Blot
) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上。目前主流方法是电转印法,分为湿式转印与半干转印。湿式转印是将胶块垂直方向夹在湿式转印槽内进行电转印。以E-Blotter湿转槽为例,一般使用垂直电泳槽的缓冲液槽体,将内部垂直电泳电极替换为...
western
blot
的工作原理
答:
工作原理 Y|-_2IU 蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象.根据所采用的支持物不同,有琼脂糖凝胶电泳,淀粉凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳等.其中,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)由于无电渗作用,样品用量少(1-100μg),分辨率高,可...
western
-
blot
中分离胶的浓度怎么选择
答:
溴酚蓝跑到胶的底部为准,26kD在10%的由下往上1/4的地方,而15%就在由下往上大约1/2(不太确定)的地方,对于分子量比较小的蛋白,胶的浓度越大,分离效果越好。但是必须考虑到,胶的孔径一旦小于蛋白-SDS复合体的直径,分子量大于这个蛋白的所有蛋白仍然不能有好的分离效果。如果孔径太大,所有...
生物科研实战——
Western
blot
答:
western
blot
原理简介:western blot技术主要是通过电泳技术区分不同的蛋白质组分,并将所分离的蛋白质转移至固体支持体上,通过特异试剂和抗体作为探针,对靶蛋白分子含量进行检测的一种方法。1.蛋白样品提取:试剂:RIPA裂解液、蛋白酶抑制剂 (1)取出含有细胞的6孔板,置于冰上进行操作 (2)吸出培养...
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