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双酶切体系
nde1和not1
双酶切
效率高吗
答:
由这两种酶组成的
双酶切体系
并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度。 如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加入1.5 μl的Xho1和Nde1并且。
Takara的NheI 和BamHI
双酶切体系
表中没有双酶切缓冲体系应该如何选用缓 ...
答:
应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧。2、为什么不用NEB的
酶
呢?可以用buffer1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶都有HF酶,效率更高,都可以在buffer4中达到100%的效率。以上,仅供参考~希望有帮助!
双酶切
后怎么保证不移码
答:
答案是:在
双酶切
载体时如果 2 个酶切位点靠得很近 必须注意酶切顺序。因为有的限制性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶 2. 回收 PCR 产物 回收的 PCR 产物片段=1 10 一般取前者 0.03pmol 后者取 0.3pmol。pmol 为单位的 DNA 转换为为?g 3. 双酶切时间及其
体系
...
为什么
酶切
实验要求加样迅速,要在冰上进行操作?
答:
我觉得跟
酶
的活性有关.你希望反应只在你设定的条件下和时间范围内进行.但是一旦底物和酶混合,就有可能开始发应,这样子有两个可能问题,一是加样时,如果放在室温,而又不是酶的最佳反应温度,有可能出现非特异性反应,二是加样如果太慢,先加的样比后加的样总反应时间长太多,结果就产生误差.冰...
...送去测序之前进行酶切检测,我想知道你的
酶切体系
是多少
答:
我一般检测的
酶切体系
,10ul,质粒视电泳条带亮弱,一般5ul 单酶切就1ul,
双酶切
,酶各0.5ul,若是割胶回收用来连接,我因为之前总是连接转化不长菌斑,所以我都是20ul,4管,最后并一管,割胶回收。检测10ul足够了,因为如果切了不对,换酶或者扔了,都不心疼...,点样5ul电泳就够了,当...
pET28a
双酶切
后连接目的基因,什么也不长
答:
pET28a
双酶切
后连接目的基因什么也不长可以考虑对DNA进行定量。一般来说,设计一个连接反应,载体量最少需要50~100ng,而外源片段的分子数是载体分子数的3~10倍(具体质量取决于你的载体或外源片段的大小)。连接
体系
为10ul,转化时用一半(5ul)转化50ul感受态细胞(最好用购买的感受态细胞,感受态的...
kpnI 与EcoRI
双酶切体系
所需缓冲液,是NEB 公司的
答:
BUFFER 2 如果KPN1是HF的就用4
我想问一下从PCR开始有带胶回收
双酶切
,载体双酶切,胶回收后怎么把载体和...
答:
我们用天根公司的胶回收试剂盒,回收目的基因及载体
双酶切
后的产物用于连接,连接
体系
如下:一般载体1微升,目的基因8微升左右(没.测OD),用T4DNA连接酶(购于TaKaRa公司)1微升,再加酶缓冲液(2.5微升)和水至总体积25微升,16度过夜后第二天转化感受态细菌。目的基因与载体的摩尔数比一般为3至10...
双酶切
老是切不完全
答:
首先,你看你的载体片段和目标片段的亮度比是不是大约10倍(因为一般T载体大小在2.5K~3k左右),如果是的话,那是正常现象。如果你能看见线性化的载体或没有切开的载体,那么建议你换一下新开封的
酶
试试。
HindIII、XhoI
双酶切
答:
这样且可能不能全部切开,如果只是鉴定的话可以,但要是用于连接就会有大量的假阳性。你可以考虑先用一种
酶切
,回收后换另一种酶切,都是用最适Buffer,效果应该会好一些
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