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反转录引物设计
做荧光定量时 扩增曲线和溶解曲线都很好 没有出现二聚体 但是为何目的...
答:
再有一个问题,你说你的模板稀释倍数越来越小依然没有产物,你觉得困扰,其实并不是像你想的那样,按照你的思路,你扩增产物应该是丰度比较低的产物,这样的扩增反应你认为模板量越大越好,其实不然,因为
反转录
buffer和realtime buffer是不同的,而且反转录体系的一些组分能够抑制realtime反应的进行,...
RNA
反转录
为cDNA 原理 主要想知道各个水浴、冰浴步骤在实验中的作用_百...
答:
第一次70度水浴5min为让RNA二级结构打开,便于
引物
结合。第一次冰浴1min为了退火,让引物能够结合RNA。37度水域是让cDNA聚合。第二次70℃水浴是再变性,让引物脱离模板RNA和cDNA第一链。第二次冰浴是为了让cDNA-RNA复性成为cDNA-RNA杂合双链。明白没有?
原核与真核生物目的基因分离方法的异同
答:
如果是真核生物则不行,因为真核生物基因组中的编码基因含有内含子序列,所以用基因组DNA作为模板是没办法获得有功能的基因的编码序列的。这时我们采用
反转录
PCR的方法,提取该真核生物的mRNA,然后用mRNA作为模板,将其反转录成cDNA,再用cDNA作为模板进行PCR,这样我们就获得了真核生物的目的功能基因基因...
我不懂PCR的意义?生物化学方面的词
答:
因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并
设计引物
做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。 但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展。发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90...
核酸和RT-Pcr是一回事吗?
答:
RT—PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。用于
反转录
的
引物
可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT及基因特异性...
常用的植物病毒分子检测诊断技术有哪些?
答:
而大多数植物病毒的核酸类型为RNA,因此,需要先进行
反转录
(RT),再进聚合酶链式(PCR)扩增。用1%琼脂糖和5%聚丙烯酰胺进行电泳,即可检出扩增片段。这里以香石竹斑驳病毒为例,介绍RT-PCR检测香石竹斑驳病毒的实验技术。用已知病毒核酸保守序列
设计引物
,分别提取病、健植物总RNA为模板,进行RT-PCR反应...
反转录
PCR和荧光定量PCR
答:
一个是RT-pcr,reverse transcription pcr的简写 一个是real-time,一般不会简化为“rt-pcr”,又称实时定量pcr,Q-pcr,应该就是你说得荧光定量 而你要测mRNA的量,就是先
反转录
成cDNA,再作定量pcr,就是前两者的合,常称为qRT-PCR 有很多real-time的试剂盒,你可以网上看下说明书 ...
逆
转录
酶的三个功能
答:
逆转录酶的三个功能:1、RNA为模板指导的DNA聚合酶活性;2、DNA为模板指导的DNA聚合酶活性;3、RNaseh活性。RNA指导的DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为
引物
,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。
反转录
酶中不具有3′→5′外切酶活性...
各位高手谁能给我详细的讲解一下PCR技术的过程
答:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物
应遵循以下原则: ①引物长度:15-30bp,常用为...
为什么从真核细胞中提取目的基因导入
答:
原因是因为
反转录
法得到的目的基因中不含有内含子 ,所以在真核生物或者原核生物中都可以得到表达.从基因文库中获得目的基因中含有内含子,真核生物中有相应的机制,能切除内含子转录的部分.真核生物中,内含子转录的部分不表达,结果和供体细胞合成的蛋白质相同.原核生物中没有相应的机制,不能切除内含子...
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