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实时荧光定量pcr板
荧光实时定量PCR
要购买哪些试剂和材料
答:
4.
荧光定量PCR
试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。
荧光定量pcr
原理
答:
荧光定量pcr
原理是:在PCR扩增反应体系中加入荧光基团,通过对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的
实时
检测,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。开始时,探针完整地结合在DNA任意...
荧光定量pcr的
检测下限是多少
答:
pcr荧光定量
检测下限25拷贝。在另外回的一组管子中,加入已知拷贝数的DNA同时扩增,每个管子中加入的数量是不同的,但是从最小数目到最大数目的这个范围涵盖了样本中DNA拷贝数。PCR反应完成后,把已知拷贝数DNA的量和
PCR荧光
Ct值制成标准曲线,再把待测样本的CT值和该标准曲线比对,就可以得到样本中的...
qpcr原理及应用
答:
qpcr原理是在
PCR
扩增过程中,通过
荧光
信号,对PCR进程进行
实时
检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为
定量
的依据。因而发达国家在相关方法和仪器方面的研发非常快,成为分子生物学诊断的主流。应用行业:各级各类医疗机构、大学及研究所、CDC、检验检疫局、兽医...
荧光定量PCR
的操作步骤
答:
荧光定量PCR
实验步骤: ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相,中间层以及无色水相上层。RNA...
荧光定量PCR
的模板可以是DNA吗?内含子对其有无影响?
答:
在
实时荧光PCR
中。模板的
定量
有2种方法:绝对定量和相对定量。绝对定量一般通过已知的标准曲线来确定我们所感兴趣基因的拷贝数;相对定量指在一定样品中靶序列相对于另一参照序列的量的变化.如果你做的是DNA的定量,可以用DNA 模板。你用质粒作为标准品做标准曲线,最后可以换算出来拷贝数,这是绝对定量。...
实时定量PCR
的结果是怎样分析的
答:
1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算。2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算。3、举例如下:对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18,内参CT值14。4、首先算加样量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
实时荧光定量PCR
和定量PCR有什么区别
答:
实时荧光定量PCR
和定量PCR有什么区别 实时荧光是反应荧光数值定量,普通那种是通过条带半定量,现在做半定量的已经很少了,除非是一些验证试验必须要图的
荧光定量
RT-
PCR
与
实时荧光
RT-PCR说的是一码事吗
答:
Real Time-PCR既可以定性又可以定量,中文文献中往往是根据Real Time-PCR在本实验中的作用而命名的,若实验中只要求定性(比如用探针法检测某物种的特异性基因),作者一般会将其翻译为
实时PCR
或
实时荧光
PCR,但也有不太专业的人会翻译为
荧光定量PCR
;若实验中要求定量,作者都会将其翻译成什么什么定量...
荧光定量PCR的
荧光信号强度和什么有关系
答:
PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,所以根据最终的 PCR 产物量不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段, PCR 产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在
实时荧光定量 PCR
技术中引入了两个非常重要的概念:荧...
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