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对阳性克隆株的鉴定方法
pPIC9K转化酵母时为什么要线性化,不同的酶切位点的产生的线性化的酵母...
答:
再用电打孔
法
转化酵母(Pichia pastoris),用缺组氨酸MD平板筛选
阳性株
并在含G418的YPD培养基中筛选多拷贝插入菌株. 结果:用所设计的引物扩增出两端分别带EcoR I 和Not I酶切位点的βhCG DNA片段,插入pPIC9K并导入DH5α获得
阳性克隆
,经PCR 反应和双酶切
鉴定
表明重组质粒是βhCG-pPIC9K,并转化嗜甲醇酵母获得耐受4...
考研题求解答:用基因工程
方法
生产一种多肽的方案
答:
首先通过密码子表设计编码特定多肽的的DNA序列,还要加上起始密码子和终止密码子,最好在片段两段再加入合适的酶切位点方便之后与表达载体的链接,然后人工合成。通过PCR大量扩增该片段。选择合适的载体链接这段DNA,转入宿主细胞,多肽的话原核就可以,筛选
阳性克隆
菌株,逐级扩大培养,来生产该多肽。
关于T细胞和瘤细胞的问题
答:
第二节 单克隆抗体及其制备 三、筛选
阳性克隆
与克隆化 ① 筛选:经过免疫,动物脾细胞中只有5%能够产生 抗体,只有这些细胞与骨髓瘤细胞融合后才 能产生杂交瘤细胞。融合后的第8-9天,就必须对能够产生 抗体的杂交瘤细胞进行筛选。一般采用酶联 免疫吸附检验法 (enzyme –linked immunosorbent assay, ...
克隆
是什么意思
答:
但是我们通常所说的
克隆
是指通过有意识的设计来产生的完全一样的克隆。在生物学上,克隆通常用在两个方面:克隆一个基因或是克隆一个物种。克隆一个基因是指从一个个体中获取一段基因(例如通过PCR
的方法
),然后将其插入另外一个个体(通常是通过载体),再加以研究或利用。克隆有时候是指成功地
鉴定
出某种表现型的基因...
动物细胞工程的过程
答:
其中ELISA法最简便,RIA法最准确。
阳性克隆的
筛选应进行多次,均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。5)克隆化 克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的,有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞
株
。克隆化
的方法
很多,而...
电泳技术在生物分离工程中的地位
答:
曾有作者报道采用二维电泳和银染进行CSF蛋白质的分离与
鉴定
,
方法
繁复,耗时,现采用高分辨率琼脂糖凝胶电泳分离CSF中的蛋白质,并经抗原和辣根过氧化物酶标记的特异性IgG抗体进行反应来鉴定“寡
克隆
区带”(OCB),经此酶免疫标记放大技术和显色步骤,蛋白质浓度达31-125ul/L即可予以检测,可使检测灵敏度提高了100倍,这样...
有关蛋白质的综述,大约4000
答:
该
方法
与前一种方法的区别是,将表达6000种不同"猎物"蛋白的酵母细胞混在一起构成文库,再将这个文库分别与6000
株
表达不同"诱饵"蛋白的酵母细胞接合,再进一步筛选
鉴定阳性克隆
,即"诱饵"与"猎物"发生相互作用的克隆。根据这篇报告,上述两种策略得到了不同的结果,相比之下阵列筛选法更为有效,而文库...
克隆
是什么
答:
因此,哺乳类的这种繁殖
方式
称为有性繁殖。
对于
动物
克隆
来说,就是不需要精子参与,细胞或动物个体数量就可不断地繁殖增多,好像是一种工业产品按一定模型不断复制一样,以这种方式复制出来的动物外形、性能和基因类型等完全一样。目前,克隆哺乳动物
的方法
由简单到复杂有几种:胚胎分割、人工授精与胚胎...
挑取单
克隆
菌株,摇菌后检测为
阳性
,再将菌液接种到新鲜培养基(含必要...
答:
之前摇菌时加抗生素了吗?如果没有就不能说是
阳性
菌。如果加了,应该是操作的问题。保证你每步操作都是正确的。包括培养基配制、接种过程、摇菌环境。
酵母单杂交
方法
分析转录激活活性的原理和过程
答:
经对2个
阳性克隆
pYGPE1和pYGPE2
的鉴定
发现pYGPE1的插入片段与大鼠原癌基因c-juncDNA具有99 %同源性,其编码的氨基酸残基序列与大鼠c-jun蛋白具有100 %同源性,pYGPE2的插入片段与大鼠线粒体腺苷酸转位酶cDNA具有99 %同源性,其编码的氨基酸序列与大鼠腺苷酸转位酶具有100 %同源性,并由此得出结论c-jun...
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