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筛选阳性克隆的方法
叙述动物
克隆
技术对生物界产生的影响和意义
答:
同时,采用转基因体细胞系,可以在实验室条件下进行转基因整合预检和性别预选。在核移植前,先把目的外源基因和标记基因(如LagZ基因和新霉素抗生基因)的融合基因导入培养的体细胞中,再通过标记基因的表现来
筛选
转基因
阳性
细胞及其
克隆
,然后把此阳性细胞的核移植到去核卵母细胞中,最后生产出的动物在...
制备单
克隆
抗体的过程
答:
(一)脾细胞 1.材料 (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 (2)1640培养液 单
克隆
抗体制备流程 (3)2.5%FCS-1640营养液 2.操作
方法
(1)拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2)将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件下取脾。 (3)把脾放入5ml含有2...
酵母双杂交文库构建和
筛选
-宝吉生物
答:
克隆阳性
率大于95%。 1.我们是采用同源重组
的方法
构建文库,没有经过任何的内切酶切割和连接过程,确保不会出现基因被酶切切断的情况,能够保证基因的完整性,而Clonetech的是用酶切连接
的方式
构建的。 2.由于我们采用的是重组的方式把cDNA重组到载体上,相对clonetech的SMART的T4连接酶的方法效率要高的多,我们承诺原始库...
单
克隆
抗体制备的基本原理与过程?
有什么
意义
答:
杂交瘤
阳性克隆的筛选
与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学
方法
,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所...
酵母双杂交实验有哪些注意事项
答:
这种情况需要对
阳性克隆
再次划板2~3次,以确保每一个酵母克隆中只含有一种文库蛋白和诱饵蛋白;另外划板的次数也不宜过多,否则会出现蛋白表达质粒丢失的情况。 其他一些不明原因造成的假阳性—这种情况需要将筛到的候选文库质粒和表达诱饵蛋白的质粒重新共转入酵母细胞或者通过酵母杂交
的方式
重新验证,如...
如何测定一段已知序列DNA的旁侧序列
答:
首先, 选择合适的限制性内切酶消化含长插入片段的DNA克隆, 其中一种酶切在已知的旁侧序列上, 另一为随机选择; 然后酶切混合物与线性化的质粒载体连接, 转化细菌得到一"亚克隆库"; 将其中的克隆挑选入96孔板培养后, 按行或列混合菌液得到相应的"pool"; 最后, 用PCR
方法筛选
获得含靶DNA片段的
阳性克隆
, 其中所...
什么是单
克隆
抗体?
答:
4.杂交瘤
阳性克隆的筛选
与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学
方法
,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所...
单
克隆
抗体两次
筛选的
理由?
答:
第一次:
筛选
出AB型细胞(A:浆细胞,B:骨髓瘤细胞),不要AA、BB型。第二次:筛选出有特异性的杂交瘤细胞,检验
阳性
。单
克隆
细胞特点:灵敏度高、特异性强、可大量制备 杂交瘤细胞特点:能体外大量繁殖...忘记了...详细请看人教版生物选修三 ...
在分子生物学中常用为
克隆
表达载体的质粒有哪些,及其特点
答:
①具松驰型复制(ColE1)复制(replicon)质粒自我增殖所必少基本条件并协助维持使每细胞含定数量质粒拷贝 ②复制外存几单酶切位点(或
克隆
位点)便目DNA片段插入 ③具插入失筛选标记理想质粒载体应具两种抗菌素抗性标志氨苄青霉素抗性基(Ampr)四环素抗性基(Tetr)等便平板直接
筛选阳性
重组 ④量相较较高...
ligation-independent cloning
答:
在设计PCR扩增引物时加入与LIC载体互补的序列,PCR产物用3’→5’的内切酶消化出单链与载体互补的序列。通过这种
方式
就可以把目的片断定向、高效地插入LIC载体上。 一般的pET载体是先在不含DE3片段的菌株中进行
克隆筛选
,之后再把
阳性克隆
转化进入表达菌株,如BL21(DE3)中,通过IPTG诱导进行表达。而...
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