我想问一下“DNA小片段建库中的PCR反应温度和时间是怎么样的呀？整个实验过程有什么特别需要注意的吗？

Question

如题所述

Answer 1

变性是90~95℃，30~60秒；退火是37~60℃，30~60秒；延伸是70~75℃，30~60秒，再重复此循环25~30次，最后一次升温是72℃延伸5分钟。
注意事项：1.引物长度一般15~30bp，尽可能提高G+C的含量，避免连续相同碱基排列或回文序列。
2.模板的量不宜太多。
3.dNTP(原料，四种）浓度不宜过高，浓度过高会导致增加错配率。

Answer 2

ddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddddnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa