T载体克隆实验过程

Question

如题所述

Answer 1

以下是T载体克隆实验过程的改写内容:

实验一：目的基因与载体连接

所需器材：旋涡混合器、微量移液器、离心管、离心机、干式恒温器
试剂：T载体、T4 DNA连接酶、缓冲液、无菌dd Water
步骤：


设定恒温器至14~16°C。
准备10ml连接液，包括4ml目的基因、1ml载体等。
轻轻混匀后离心，置于恒温器中过夜。
产物可立即转化细胞或冷藏备用。

实验二：大肠杆菌感受态细胞制备

所需器材：旋涡混合器、移液器、离心机、恒温摇床等
试剂：E. coli、LB培养基、CaCl2溶液等
步骤包括培养、离心、加入CaCl2溶液处理、离心后储存或立即转化。

实验三：转化克隆筛选与鉴定

器材：旋涡混合器、镊子、离心管、超净工作台等
试剂：LB培养基、PCR试剂、限制酶等
方法一：快速PCR筛选，通过PCR产物比对鉴定。
方法二：提质粒再PCR或酶切鉴定，确认外源插入片段。

以上步骤完成后，务必在实验区域进行消毒，确保操作环境清洁。