DNA限制性内切酶消化实验中需要哪些主要试剂和器材?

如题所述

第1个回答  2024-06-01

DNA限制性内切酶消化实验所需试剂和器材列表


试剂:



    限制性内切酶: 如EcoRI、Hind Ⅲ、PstⅡ、BamH1等,需在-20℃冷藏以保持活性。常用样本如λDNA、pBR322等同样需储存在-20℃。
    限制性内切酶缓冲液: 需要根据特定酶的使用说明进行配制,用消毒双蒸水配置,储存在-20℃。具体配方如:0.89 mol/L Tris、0.89 mol/L硼酸、0.02 mol/L EDTA Na2,pH8.0。
    电泳缓冲液: 10×TBE电泳缓冲液,含0.89 mol/L Tris、0.89 mol/L硼酸、0.02 mol/L EDTA Na2,需高温灭菌后,4℃保存。
    上样缓冲液: 6×上样缓冲液含有0.25%溴酚蓝、40%蔗糖,配制后冷藏于4℃,使用消毒双蒸水。
    溴化乙锭溶液: 5mg溴化乙锭溶于1ml消毒双蒸水中,4℃避光保存。
    消毒双蒸水: 实验过程中的基础液体。

器材:



    恒温水浴: 用于控制反应温度。
    电泳设备: 包括电泳仪和水平电泳槽,用于DNA片段的分离。
    移液器: 50μl可调移液器,用于精确量取液体。
    检测设备: 紫外灯(推荐使用上海康华生化仪器制造厂的产品)用于检测和分析电泳结果。

扩展资料

DNA限制性内切酶消化是基因分析中的关键步骤。内切酶是最关键的工具酶。限制性内切酶是一类具有严格识别位点,并在识别位点内或附近切割双链DNA的脱氧核糖核酸酶。一定的 DNA分子的核苷酸顺序是一定的,某种限制性内切酶作用于该DNA的切点数一定,故所得的 DNA片段数和片段的大小也一定,通过琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酸胺凝胶电泳分离,以标准 DNA作对照,溴化乙锭染色后,测出各 DNA片段移动的位置和距离。以各标准 DNA片段的分子量对数为纵坐标,各标准 DNA片段的移动距离为横坐标,求出各样品DNA片段的分子大小。

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