用钙离子处理成为感受态细胞的转化方法

如题所述

第1个回答  2022-12-07

原因:目的基因导入植物细胞时,由于没有经过钙离子处理没有变成感受态细胞,细胞的通透性小,目的基因难以进入细胞。

感受态细胞主要原理:

1、通过处理使细胞的通透性变大。

2、使得细胞膜表面出现一些孔洞,便于外源基因或载体进入感受态细胞。

3、由于细胞膜的流动性,这种孔洞会被细胞自身所修复。

扩展资料

氯化钙法:

1、将快速生长的大肠杆菌置于经低温(0℃)预处理的低渗氯化钙溶液中,便会造成细胞膨胀,同时Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构,促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来,离开所在区域,诱导细胞成为感受态细胞。

2、此时,将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激(90s),细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动,并随机出现许多间隙,外源DNA就可能被细胞吸收。进入细胞的外源DNA分子通过复制、表达,实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。

3、将转化后的细胞在选择性培养基上培养,筛选出带有外源DNA分子的阳性克隆。

参考资料来源:百度百科-感受态细胞

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