第1个回答 2022-06-18
BIOG操作步骤：
1. 请自行准备：无水乙醇、生理盐水、二甲苯及无RNA酶1.5mL离心管。
2. 取出析出液和洗涤液，按以下操作：a) 析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇，混匀；9mL加入51mL无水乙醇，混匀。
b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇，混匀；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。
c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。
3. 样本处理：a) 取5-8 μm 厚石蜡切片5-10张，60℃放置5分钟，放入装有二甲苯的玻璃瓶中，浸泡10分钟后，用手术刀或刀片，将组织刮下，放入1.5 mL离心管。也可将石蜡切片60℃放置5分钟后，直接放入含1.2 mL二甲苯的1.5 mL离心管，震荡脱蜡10分钟，12,000 rpm室温离心2 min，弃上清。 b）石蜡块：手术刀刮取20-30 mg石蜡包埋组织样本（尽量去除石蜡部分），放入1.5 mL离心管，加入1 .2mL二甲苯，震荡脱蜡10分钟，12,000 rpm室温离心2 min，弃上清。c）福尔马林固定、未包蜡样本：取30 mg样本，用手术刀剪碎，置于1.5 ml离心管中，加入500 μL生理盐水，涡旋振荡20秒， 12,000 rpm室温离心2 分钟，弃上清。重复2次，转步骤6处理。
4. 在上述处理过的脱蜡样本管中加入1.2 mL 无水乙醇，旋涡震荡30 秒，12,000 rpm 离心 2分钟，弃上清（注意不要倒掉沉淀，少量乙醇可用吸水纸吸去，未包蜡样本不需此步）。
5. 开盖，室温放置5分钟，去除残留无水乙醇。
6. 加入100 μL生理盐水，震荡混匀20秒；加入200 μL裂解液，20μL消化液A，振荡混匀，室温放置5分钟。
7. 加入20 μL消化液B，震荡混匀，56℃水浴90分钟至组织完全消化裂解。（最好消化至溶液中无组织碎片，皮肤、肺脏、子宫等结缔组织较多的切片应适当延长消化时间。）
8. 加入500μL析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。
9. 将吸附柱放入收集管内，将混合物吸入吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，弃收集管内废液。
10. 将吸附柱放回收集管内，加500 μL洗涤液至吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，弃收集管内废液。
11. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm离心2分钟，离去残留的洗涤液。
12. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入50-100 μL 洗脱液，静置3分钟，12,000 rpm 4℃离心2分钟，收集RNA溶液。提取的RNA即可用于下一步实验或-70℃保存。
注意事项：
1. 为防RNA酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水 。
2. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质，请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。
3. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象，置于 37℃水浴中溶解即可。