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Western blot实验电泳时 Marker条带不清晰,很弥散,无法辨别有几条带,请问什么原因可以导致啊?
如题所述
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其他回答
第1个回答 2010-11-22
如果只是marker不清晰,就是markr没煮好,或者降解了。重新换一个新marker,严格按配方煮。
如果所有条带都这样那就是胶的问题。
胶的前沿跑的齐吗?速度如何?如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
第2个回答 2010-11-22
Marker上样量太少
国产marker得上到5ul以上
进口的3ul以上
第3个回答 2010-11-22
我觉得主要是胶和电泳缓冲液的问题,
Tris 8.8 6.8 浓度,pH是否正确。SDS的纯度可能也有关系。
丙烯酰胺
的浓度,交联度合适不合适。
做胶的时候各种溶液是否加的正确,胶的浓度是否合适,
电泳缓冲液的浓度,pH有无问题。
marker是不是时间太长了。本回答被提问者采纳
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western
blot
为
什么marker不清晰
答:
可能的原因有,
maker加的量少
,半干法转膜的时候转缓液加多了,maker没有保存好,如长期放在室温分解了,也可能是跑电泳的
胶的问题
。跑胶的时候电压越小条带相对弥散些,不过还不至于maker不清楚。
Western
Blot
结果
条带
全面分析,总有一款适合你
答:
高背景</: 可能是封闭步骤、一抗浓度或洗膜不够彻底
,解决建议</: 调整一抗浓度,延长洗膜时间以确保清晰。非特异性条带</: 一抗可能未针对性强,对策</: 寻找更特异的一抗替换现有。气泡困扰</: 电转时膜上的气泡可能导致条带瑕疵,解决</: 在电转过程中确保膜表面无气泡。条带中心空白</...
跑
westernblot时电泳时
的
条带
呈斜行是咋回事
答:
跑westernblot时电泳时的条带呈斜行可能有以下几种原因:1. 电泳凝胶配制时未搅拌均匀
,这可能导致条带未能直线跑完。2. 电泳凝胶中混入气泡,这可能使条带被挤压倾斜。3.
样品缓冲液存在干扰
,这可能导致条带迁移率不统一。4.
上样量过大,被其他泳道挤压
,这也可能使条带呈斜行。请注意,以上只...
做
Western
Blot
跑
电泳
之后的胶上
Marker
的
条带,
比较
清晰,
但与模板Marke...
答:
得看你少的哪条带,一般来说最后一条带比较容易看不到,
可能是由于你配胶的溶液放置时间长了浓度不够了
,比如30%的丙烯酰胺。也可能是跑出去了或没跑完你就停了。
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