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双元表达载体的构建
双元表达载体
系统的原理
答:
1.一般植物
表达载体
是成套使用的,一套中有两个,一个是带有可以供插入外源表达基因的MCS和筛选标签的融合蛋白(通常是GFP或Gus)的普通载体。另一个载体就是
双元
载体(binary-vector)了。通常我们是先将外源基因插入带有筛选标记的载体,然后将此载体上的35S promoter-expression gene-gfp这段全部切下...
双元表达载体
系统原理
答:
构建
过程涉及将带有35S promoter-expression gene-gfp的双元载体转化至农杆菌,然后通过农杆菌的ti-DNA转移机制,将LB和RB之间的片段整合到植物的基因组中。常用的双元载体组合如pCAMBIA3101+pUC-35S-GFP和pZPZ211+pAA,它们各自发挥其功能。
双元表达载体
系统的核心是辅助Ti质粒和微型Ti质粒。辅助Ti质粒,...
双元表达载体
系统两部分
答:
双元表达载体
系统主要由两个关键组件构成:首先,是卸甲Ti质粒。这种质粒失去T-DNA区域,从而失去了导致癌变的能力,其主要功能是提供编码Vir蛋白的Vir基因。Vir基因编码的virD2蛋白具有识别功能,它能识别农杆菌转运DNA(T-DNA)两端的24bp序列。通过这一过程,virD2蛋白会将T-DNA以单链形式切割,同时,vi...
双元表达载体
系统的两部分
答:
双元表达载体
系统主要包括两个部分:一部分为卸甲Ti质粒,这类Ti质粒由于缺失了T-DNA 区域,完全丧失了致瘤作用,主要是提供Vir基因编码表达Vir蛋白的功能,VIR基因编码的virD2蛋白相当于反式作用元件,能够识别农杆菌转运DNA(T-DNA)两端24bp序列,进而将T-DNA以单链的形式切割下来,同时,VIR基因编码...
农杆菌转化法的原理
答:
农杆菌转化法的原理是
构建双元表达载体
系统,由两种质粒组成,一种是位于大肠杆菌中的穿梭质粒,另一种是位于农杆菌中的辅助性质粒。将重组质粒电转化到农杆菌感受态细胞中后,用含有重组质粒的农杆菌去侵染植物根部切口,通过辅助性质粒的Vir区表达蛋白与重组质粒T-DNA区(目的片段)的反式作用激活T-DNA...
为什么要
构建双元载体
系统
答:
1、解决常规
载体
系统在基因传递过程中存在的一些问题,如基因
表达
不稳定、慢速和低效等。2、提高基因转染的效率和准确性。
根癌农杆菌介导转化
答:
双元表达载体
可以通过冻融法、三亲交配或电激法转化(大肠杆菌供体菌+大肠杆菌协助菌+根癌农杆菌受体菌),将构建好的质粒载体转入根癌农杆菌。根据目的的不同,
构建的
双元载体可分为两种类型:随机插入型和靶基因插入型的质粒载体。靶基因插入型的质粒载体要在抗性基因两端连接一段与目的基因序列同源并且长度合适的DNA...
2021-04-16 花序浸染法转化拟南芥
答:
农杆菌GV3101重组菌株,重组
双元表达载体
pCAMBIA1300 ,拟南芥 实验步骤 1.在转化前三天,接种含有双元
载体的
农杆菌到5ml含有抗 生素(庆大霉素20mg/L,卡那霉素50mg/L)的LB液体培 养基中,28℃下震荡培养2天。2.两天后,将1ml培养的农杆菌转移到100ml含有抗生素的 LB液体培养基中,28℃继续...
构建
植物siRNA有哪些
表达载体
?
答:
构建
植物siRNA
表达载体
:设计编码产生小分子发卡RNA(hairpin:RNA,hpRNA)的DNA序列,编码hpRNA的DNA各链反向互补,中间加上7个碱基的间隙,将其连接到农杆菌
双元
载体质粒上,构建植物表达载体。多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子(polⅢ)中的一种,操纵一段小的发夹RNA(short:hairpin:...
请教一个
双元表达载体的
问题,双元表达载体系统代表农杆菌转化需要两个质...
答:
双元表达载体
系统其实是一个质粒,它包含两个部分,一个部分是能够被转移的T-DNA,另一个是能够帮助T-DNA转移的Vir区。T-DNA转移区是有左右边界的,在转基因时会在左右边界处断裂,只将左右边界以内的T-DNA区域整合到植物基因组中。
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