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反转录引物设计
反转录
PCR合成cDNA
引物
的选择
答:
首先,当特定mRNA由于含有终止
反转录
酶的序列而难以完整复制时,可以使用随机六聚体
引物
。这种非特异性的引物能使所有RNA分子作为cDNA第一链模板,PCR扩增过程中会赋予所需的特异性。然而,用随机六聚体合成的cDNA中,大约96%来源于rRNA,而非目标mRNA。另一种策略是采用Oligo(dT)引物,它专一性地匹配真...
反转录
PCR的
引物
答:
所以
反转录
PCR的
引物设计
就是把cDNA当做双链一样进行的。
如何
设计
基因cds序列的pcr
引物
答:
设计基因CDS区的PCR引物是基因克隆和转染实验中的关键技术。首先,从细胞中提取总RNA,通过
反转录
将其转化为cDNA模板。对于目标基因如MYOD1,关键步骤是定位其mRNA和CDS序列。在NCBI等数据库中找到CDS部分,将其完整复制到PCR
引物设计
工具,如Primer 5.0中。正向引物应从CDS的起始核苷酸开始,通常选择18bp...
关于pcr
引物设计
:我做
反转录
pcr,目的基因是大鼠ACE2和ACE。
答:
2、看来你是新手,我的建议是在pubmed上查文献,肯定有人用过,关键词是ACE2、real-time pcr或quantitative pcr,当然还有Rat。3、最后再回到ncbi的genebank,用你得到的引物去检索,核对下序列是否完全正确。有时老外的资料也是有错的 相对定量PCR。
引物设计
有一定要求,片段长度已经说了,同时要做一个...
求助miRNA QRT-PCR
引物设计
答:
miRNA
引物设计
(茎环法+染料法检测)设计方法:通用茎环后端加miRNA后面6个碱基的反向互补序列为
反转录引物
,正向引物为miRNA去除后面6个碱基的序列,反向引物在茎环上。反转录茎环通用序列:GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACmiRNA序列:>mmu-miR-99b-5pMIMAT0000132 Mus musculus miR-99...
求助miRNA QRT-PCR
引物设计
答:
miRNA
引物设计
(茎环法+染料法检测)设计方法:通用茎环后端加miRNA后面6个碱基的反向互补序列为
反转录引物
,正向引物为miRNA去除后面6个碱基的序列,反向引物在茎环上。反转录茎环通用序列:GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACmiRNA序列:>mmu-miR-99b-5pMIMAT0000132 Mus musculus miR-99...
用rna
反转录
的cdna克隆基因的cds全长怎么
设计引物
答:
也可以做cDNA克隆,然后再做,前者的话就可以直接根据其基因序列NG号
设计引物
,如果是做CDNA的话就根据其mRNA的序列NM号设计引物. 你是根据其cDNA设计的引物,你需要下提取mRNA,然后
反转录
成cDNA,才能够扩增出来.如果是根据其基因序列设计的,你需要先将你的目的序列定位到GENE上,然后设计引物 ...
反转录
自己合成poly(T)
引物
多长比较合适
答:
首先,我们需要扩增的是DNA,
反转录
酶是必须的.楼主应该知道,DNA的PCR不像体内DNA合成那样,体内合成需要RNA
引物
,而体外是不需要RNA引物,而是随机引物.这里的随机引物要从这几个方面来理解.1)mRNA有Poly-A尾巴,我们可以合成一段Poly-T作为引物 2)有一个矛盾需要解决,就是Poly-A的尾巴长度是不确定的,...
反转录
用随机
引物
和Oligo引物的原理
答:
原理:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo或随机
引物
利用逆转录酶
反转录
成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。
没有基因组信息,如何
设计引物
?请指点~~
答:
找亲缘性最好的物种,看看能不能找到它们的序列,或者看看有没有人发这方面的文章 又或者,用oligo dT
反转录
,然后根据亲缘性序列在前端
设计引物
,看看能不能扩增出来,多设几个,拿扩增出来的进行测序再设计引物
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