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融合蛋白表达载体的构建
融合蛋白表达载体
如何
构建
答:
两个
蛋白
的序列,你给放在一起,在第一个蛋白前加ATG,然后在最后一个蛋白最后加终止密码子,然后跟据
载体
的需求,在ATG前和终止子后加没切位点,没切链接到表达载体上,就OK了,还可以再详细些,参见随便个表达载体的manual吧
gst pulldown靶
蛋白
制备方法?
答:
1、
构建表达载体
:将目标蛋白质的编码序列克隆到GST表达载体中,使用限制性内切酶将克隆的DNA片段插入到GST表达载体中,使其与GST基因相连。2、转染表达:将构建好的表达载体转化到大肠杆菌中,并在含有诱导剂(如IPTG)的培养基中诱导表达,使其产生靶蛋白-GST
融合蛋白
。3、细胞破碎:通过超声波、高压细...
什么是
融合蛋白
视频时间 00:43
怎样
构建
慢病毒
载体
用来标记原代细胞的细胞骨架?
答:
原代细胞较难转染,可以先
构建
慢病毒,再用慢病毒进行转染。1.将actin基因,放入慢病毒
融合表达载体
,与荧光
蛋白
(GFP)融合表达,注意避免移码突变。2.然后将重组质粒以及辅助质粒共转染细胞,可以用脂质体法,慢病毒配套细胞一般为293。3.收集慢病毒,浓缩。4.用慢病毒转染原代细胞。做好先做预实验。5...
蛋白的表达
与纯化
答:
如果还是纯度不符合要求,可以在
表达蛋白
最初在
构建表达载体
质粒的时候在蛋白的ORF后面加上HIS-标签,这样得到的蛋白不但可以用于HIS柱的进一步纯化,在不确定自己的
融合蛋白
是否有表达的时候,也可以单单用抗HIS的抗体做一WB,分析确认目的蛋白是否表达,这是
蛋白表达的
常用手段。5 经过纯化后的蛋白仍然含有...
大肠杆菌有
表达
分泌型
蛋白的载体
吗
答:
融合表达
是将目的蛋白或多肽与另一个
蛋白质
或多肽片段的DNA序列融合并在菌体内表达。融合型
表达的
载体包括分泌
表达载体
、带纯化标签的表达载体、表面呈现表达载体、带伴侣的表达载体。大肠杆菌表达系统优点在于遗传背景清楚、繁殖快、成本低、表达量高、表达产物容易纯化、稳定性好、抗污染能力强以及适用范围广...
如何采用一个真核
表达载体
中表达多个
蛋白
答:
方法有好多的:分开
表达
,装不同的promoter,启动不同的蛋白转录。
融合蛋白
,就是把两个
蛋白融合
在一起表达。如果要用酶切开,可以在中间加入一段link。加入ires--内部核糖体进入位点,虽然两个蛋白是用一个promoter启动的,但是蛋白石分开翻译的。等等~不多举例啦~...
酵母双杂交技术原理和步骤
答:
具体实验步骤如下:1.
构建
酵母
表达载体
:将含有自身复制元件2μ、酵母转录起始序列、选择性筛选的标记基因等元件的酵母表达载体与感兴趣的
蛋白质
基因
融合
,在表达载体中得到融合基因。2.构建Gal4转录因子启动子激活报告基因的表达载体:将报告基因与Gal4转录因子启动子串联,在表达载体中得到表达Gal4转录因子...
构建
编码区点突变基因序列及
表达载体
实验全过程
答:
同义突变: 看似无害的碱基对替换,却可能因密码子的简并性而保持
蛋白
功能,如图4所示,这是进化的微妙平衡。接下来,我们将探索
构建
一个野生型TNF-α真核
表达载体的
详细过程。构建TNF-α的遗传密码首先,从生物数据库下载TNF-α的完整序列,锁定编码区(CDS),如图5-8所示,这是实验的起始点。引子...
关于植物油体
蛋白表达
纯化体系
答:
这使人们想到,将外源小分子量蛋白编码基因插入oleosin基因的5`端或3`端,
构建
由oleosin启动子驱动的“oleosin目的蛋白”植物
表达载体
,转化受体植物,不会影响oleosin在植物油体上的定位。由于oleosin为种子特异表达,并镶嵌在油体表面,目的蛋白在转基因植物中是以
融合蛋白的
形式与oleosin一起在油体中特异表达。3.2 ...
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