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防止载体自身环化
如何有效的降低
载体自身环化
作用
答:
(1)用碱性磷酸酶处理限制酶酶解产生的线性
载体
分子。碱性磷酸酶可除去线性载体DNA 分子的5¹-磷酸,而留下3¹-羟基基团。经过碱性磷酸酶处理的线性载体分子,除非插入外源DNA 片段,否则就不能重新环化为有功能的载体分子。(2)采用同聚物加尾连接技术,可自动
防止
线性载体DNA 分子的
自身环
...
在基因克隆中如何
防止载体
分子的
自身环化
作用
答:
这个要看你是具体如何克隆的 如果你使用的是酶切连接,选择不同黏末端的酶一般不会发生
自身环化
如果是平端连接,则需要对
载体
去磷,也就是碱性磷酸酶处理。此时需要注意你的插入片段两边要有磷酸基团(可以引物合成时添加,也可设计平端的酶如EcoRV自己回来切),否则是连不上的。
基因工程中
如何避免载体
的自我
环化
和目的基因的双向
答:
避免自我环化
可以考虑使用双酶切位点和加CIAP处理 目的基因避免双向接入的话通过设计双酶切位点就能完美避开
基因工程中
如何避免载体
的自我
环化
和目的基因的双向插入?
答:
双酶切。在基因两端分别用不同的内切酶来酶切,
载体
上也用这两种酶来酶切。这样自己的酶切位点只能识别自己的位点,就不会发生基因方向的错误了。而且载体的两个位点互相不识别,也不会自连接。
...脱氧核苷酰转移酶处理载体后,可
防止载体自身环化
,提高重组效率_百度...
答:
用的是碱性磷酸酶处理吧。把DNA的5’-P末端转换成5’-OH末端。这样来
防止载体自身环化
。末端转移酶理论上不能
防止自身环化
。它一般用在cDNA的RACE中,来扩增cDNA。
种酶切目的基因是防治
自身环化
,”而书上为什么又说
答:
用同一种限制酶目的是让运
载体
的末端和目的基因的末端互补.所以为了
防止环化
,需要对运载体加以修饰改造,使运载体的两个末端也不相同并且都刚好与目的基因的末端互补.
基因与
载体
高效重组连接需要的条件
答:
1.如果是采用粘性末端连接法的话应该
防止载体
的
自身环化
,可以用细菌或小牛肠的碱性磷酸酶预先处理线性的载体DNA分子,去除线性载体DNA两端的5端磷酸基团,这样,在连接反应中,载体DNA的两个末端之间就无法被连接酶共价连接了。2.如果是采用的定向克隆法的话就不用考虑载体的自身环化。3.如果是平末端连接...
基因工程中将目的基因导入质粒后为什么要
防止
DNA分子
自身环化
答:
如果操作不当,目的基因 和 质粒 都有可能
自身 环化
。目的基因
自身环化
,则这个环上不含有复制起点、标记基因 ,无法进行扩增和筛选;质粒自身环化,则环上不含有目的基因,为空
载体
,是无用的。所以,必须保证目的基因和 质粒载体 二者正确连接、环化。
为什么双酶切可以
避免自身环化
?
答:
酶有特异性,不同的没切后粘性末端不同。双酶切之后,由于用的两种酶切出来的粘性末端序列不一样,所以一般
载体
不会再自连。http://baike.baidu.com/link?url=FRJwp9TS7OdIFmR3MFvoTwtr-FgAHQ8RazP9a560Z_idgLhSHbjoC4Y2xVaxlxOS7ldqRhP8n6VqKcjFfVYoWq http://baike.baidu.com/link?url...
为什么用限制酶切割目的基因时候需要使用两种以上不同的限制酶进行切割...
答:
为了
防止
目的基因和运
载体自身环化
。为保证目的基因正序插入运载体,防止反向连接。限制性核酸内切酶是可以识别并附着特定的脱氧核苷酸序列,并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶。
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