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t4dna连接酶连接什么末端
PCR后出现非特异性扩增是
什么
原因?
答:
可能是连接酶污染了核酸酶。
T4 DNA连接酶
(M1801,M1804,M1794)质量标准好无核酸酶污染,不应用其它来源的T4 DNA连接酶替换。 D)用pGEM-T或pGEM-T Easy载体,连接pGEM-T正对照,转化高频率感受态细胞(10(8次方)cfu/ug),按照指定的实验步骤,可得100个菌落,其中60%应为白斑,如产生>20-40蓝斑, 没有菌落或少...
T载体克隆实验原理
答:
T载体克隆实验的原理主要涉及重组质粒的构建、感受态细菌的制备以及β-半乳糖甘酶显色反应的选择法。首先,构建重组质粒是通过
DNA连接酶
,如
T4
噬菌体DNA连接酶或大肠杆菌DNA连接酶,将经过酶切的载体与外源DNA片段连接起来。T4噬菌体DNA连接酶可连接粘性末端和平末端,但平
末端连接
效率较低,通过调整酶浓度...
DNA
主要反映遗传物质的化学组成 怎么理解?
答:
连接酶有
T4
噬菌体
DNA连接酶
、T4噬菌体RNA连接酶、大肠埃希菌DNA连接酶等。DNA连接酶可连接平端,也连接粘端。反应需有Mg2+和ATP存在,pH7.5-7.6。最适温度37℃,30℃以下活性明显下降,但考虑到被
连接DNa
的稳定性和粘性
末端
的退火温度,一般平端连接用20-25℃,粘端连接用12℃左右。 聚合酶有DNA聚合酶(以DNA为...
T载体克隆实验过程
答:
以下是T载体克隆实验过程的改写内容:实验一:目的基因与载体连接 所需器材:旋涡混合器、微量移液器、离心管、离心机、干式恒温器 试剂:T载体、
T4 DNA连接酶
、缓冲液、无菌dd Water 步骤: 设定恒温器至14~16°C。 准备10ml连接液,包括4ml目的基因、1ml载体等。 轻轻混匀后离心,置于...
下列有关
DNA
重组技术的基本工具的相关叙述,不正确的是
答:
【答案】B 【答案解析】试题分析:DNA重组技术的工具有限制酶、DNA连接酶和载体,故A正确;载体需满足的条件之一是有一个或多个限制酶切割位点,以便外源DNA插入,故B错误;限制酶的来源主要是原核生物,故C正确;DNA连接酶分为E.coli DNA连接酶和
T4 DNA连接酶
,故D正确。考点:本题考查基因工程的...
微生物菌种的筛选
答:
(2)载体DNA的制备 选择适当的噬菌体载体用限制酶切开,得到左、右两臂,以便分别与染色体DNA片段的两端连接。(3)体外连接与包装 将染色体DNA片段与载体DNA片段用
T4 DNA连接酶连接
。然后重组体DNA与噬菌体包装蛋白在体外进行包装。(4)重组噬菌体感染大肠杆菌 将包装得到的重组噬菌体在大肠杆菌内经...
DNA
复制的拓扑性质是
什么
?
答:
复制后,这些冈崎片段由
DNA连接酶
的作用而连接成完整的新链。 基因或DNA是遗传信息的携带者,在细胞分裂过程中,亲代细胞所含的遗传信息,完整地传递到两个子代细胞。这个过程的实质问题是DNA分子如何复制成完全相同的两个拷贝,有许多酶和蛋白质参与复制过程,通过正确和完整的复制,亲代DNA的遗传信息真实地传给子代,这是...
dna
重组技术的基本工具要点有
哪些
答:
1.扩增目的基因——PCR。常用试剂盒Promega,takara等 2.提取载体质粒。根据所需质粒不同用相对应的试剂盒。2.酶切。根据酶切位点选择相应的酶。限制性内切酶常用NEB,Fermentas等公司的产品 3.连接。用
T4连接酶
把片段和载体连接起来,常用NEB,Fermentas等,有钱的实验室可用Roche,效果不错。4.转化。
2019赚钱好项目有啥好推荐的吗?
答:
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2018年医疗器械体外诊断产品分类界定结果汇总
答:
24.基因测序用文库试剂盒(DNA打断连接法): 由
末端
修复混合液、末端修复缓冲液、
T4 DNA连接酶
、T4 DNA连接缓冲液、PCR混合液、适用于Illumina测序平台的接头、通用引物和序列标签引物1-12组成。用于Illumina二代测序平台的DNA测序文库的构建。分类编码:6840。 25.测序用文库制备试剂盒: 主要由片段捕获反应液、引物消化...
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