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如何防止连接过程中载体发生自连
如何
提高目的基因和
载体
的
连接
效率
答:
为了
防止
目的两端及
载体
的两端
连接
在一起,可以用两种限制酶切割目的基因两端,同时也用这两种限制酶切割载体,这样就能形成两种黏性末端,同时也能防止目的基因和载体的
自连
。磁共振(MRI)成像具有良好的软组织对比度、高分辨成像和多参数扫描能力,且可以通过特异性磁共振分子探针来检测细胞分子水平的变化...
如何
克服
载体
自身
连接
的问题?
答:
首先要确认你的酶切位点,如果双酶切且末端不同,
自连
概率很小,一般不用处理;如果末端回文相同或是单酶切,一般会用碱性磷酸酶处理,去除磷酸化。
为什么碱性磷酸酶处理可以
防止
质粒
载体
DNA
自连
的作用
答:
你需要了解2个事实,1是,正常核酸片段两端的组成是,3‘-OH,5’-p基,正因为5‘磷酸的存在,才能和另一个片段的3-OH
发生
缩合脱水反应,谓之自连。而碱性磷酸能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。这样就不会发生缩合反应,
防止自连
的发生。
为什么用两种不同的限制酶切目的基因和运
载体
,就能
防止
运载体本身...
答:
剩下的部分在
连接
酶作用下相同的粘性末端就会配对连接,同样载体也会继续连接成环,基因和
载体连
在一一起也有,而且首尾的顺序也有两种,连接体系跑电泳结果会有4个条带,至少是4种,而且就算那个连接后的片段大小符合你要求的那段纯化后也有一部分是不能表达的。哪四种就不用写了,你肯定知道的,不能...
在上述实验中,为了
防止
目的基因和质粒表达
载体
答:
本题中想考察的是在这个
过程中
可能存在的一种错误情况,因为我们假如用同一种限制酶切割的话,我们是期待目的基因和质粒的粘性末端在
连接
酶的作用下能连接在一起从而形成重组质粒,但是由于目的基因两端的粘性末端碱基彼此互补、质粒两侧的粘性末端也彼此互补,在对应的连接酶的作用下它们有可能自身
发生
环化...
问一个分子生物学的问题,片段
连接
答:
3.如果一种感受态菌株不行的话,建议你试试其它菌株。4.你得片段加上
载体
有将近10k的大小,化学转化方法对于大质粒转化效率要低一些,你可以尝试一下电转化,祝你好运!你是做的双酶切还是单酶切?一般来讲单酶切插入目的片断的话就需要去磷酸化载体以
避免自连
.我现在正在构建一个单酶切
连接
的载体,...
CIP处理质粒载体可以
避免载体自连
?
答:
CIP处理质粒载体可以
避免载体自连
在基因克隆中
如何防止载体
分子的自身环化作用
答:
这个要看你是具体如何克隆的 如果你使用的是酶切
连接
,选择不同黏末端的酶一般不会
发生
自身环化 如果是平端连接,则需要对
载体
去磷,也就是碱性磷酸酶处理。此时需要注意你的插入片段两边要有磷酸基团(可以引物合成时添加,也可设计平端的酶如EcoRV自己回来切),否则是连不上的。
基因表达
载体
构建
过程中
第一步中为什么产生的是粘性末端而不是平末端...
答:
黏性末端可以有效
防止
基因自身成环和
载体自连
,而且可以保证
连接
方向不会错
双酶切能够
避免自连
吗?
答:
你说的这种情况确实会
发生
,我就遇到过。但是几率不会很高。如果加大浓度,
连接
的几率就大大提高。我曾经专门这样设计过实验呢。不过切质粒后立刻跑胶,而不加连接酶,一般自连是很少见的。“双酶切”可以
避免自连
的说法也不完全错。因为和一个酶相比,可能性大大降低了。我说的上面的实验是把两个...
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