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环状聚合酶延伸反应
pcr
反应
哪一步要循环?还是变性、退火、
延伸
整个一起循环?
答:
pcr
反应
时变性、退火、
延伸
整个一起循环。PCR是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA
聚合酶
的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性—低温退火—引物延伸”三步反应的多次循环,使DNA片段在数量上呈指数增加,从而在短时间内获得所需的大量的特定基因...
pcr
反应
哪一步要循环?还是变性、退火、
延伸
整个一起循环?
答:
pcr
反应
时变性、退火、
延伸
整个一起循环。PCR是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA
聚合酶
的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性—低温退火—引物延伸”三步反应的多次循环,使DNA片段在数量上呈指数增加,从而在短时间内获得所需的大量的特定基因...
为什么生物体内找不到3’→5’方向的
聚合酶
?
答:
再次 ,我们可以利用反证法来说明 “为什么 DNA
聚合酶
的
延伸
方向都是 5′→3′,而不是 3′→5′”。假设链的延伸方向为 3′→5′,基于能量的需要 ,其多核苷酸链的 5′端必须带有三磷酸基团 (p~p~p) ,才能与游离的 dNTP起
反应
,而 dNTP也有 p~p~ p,由于磷酸基团之间强的电负性 ,使 ...
聚合酶
链式
反应
(PCR技术)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温...
答:
C
比较一下化学分子结构,了解药效。
答:
PCR的改进与完善 Mullis最初使用的DNA
聚合酶
是大肠杆菌DNA聚合酶I的 Klenow片段,其缺点是:①Klenow酶不耐高温,90℃会变性失活,每次循环都要重新加。②引物链
延伸反应
在37℃下进行,容易发生模板和引物之 间的碱基错配,其PCR产物特异性较差,合成的DNA片段不均一。此种以Klenow酶催化的PCR技术虽较...
PCR扩增的
反应
条件
答:
Mg2+ 1.5mmol/L;加双或三蒸水至 100ul。PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA
聚合酶
的酶促合
反应
,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物
延伸
”三步反应的多次循环,使DNA片段在数量上呈指数增加。
简述三种DNA
聚合酶
的作用特点和主要功能
答:
2.能沿5'端到3'端方向外切DNA(切除引物)3.能沿3'端到5'端方向外切DNA(纠错,或者说DNA损伤的恢复)DNA
聚合酶
2:1.发挥作用需要镁离子和铵根离子存在 2.同样能参与DNA聚合酶1参与的
反应
,但聚合活性低 3.能沿3'端到5'端方向外切DNA DNA聚合酶3:1.主要负责DNA链的
延伸
2.能沿3'端到5'端方向...
DNA
聚合酶
,解旋酶,RNA聚合酶各自的作用对象和作用时期(详细)_百度知...
答:
DNA
聚合酶
以脱氧核苷酸三磷酸(dATP、dCTP、dGTP、或dTTP,四者统称dNTPs)为作用对象,作用时期为DNA复制时期。解旋酶以DNA双链的氢键为作用对象,作用时期为DNA或RNA复制时期。RNA聚合酶以四种核糖核苷酸三磷酸(NTP:ATP、GTP、CTP、UTP)为作用对象,作用时期为转录时期。
聚合酶
联
反应
中,需要使用一种特殊的DNA聚合酶,这种酶叫做
答:
分子量大约为94kDa。这种酶的天然形式可在74℃复制DNA,在95℃的半衰期为40分钟。Taq DNA
聚合酶
在镁存在的条件下可催化核苷酸沿5'-3'方向发生
聚合反应
,形成双链DNA;同时它还具有5'-3'外切酶活性。建议使用 Taq DNA聚合酶进行PCR反应,和较高温度条件下的引物
延伸反应
,但不能用于DNA测序反应。
PCR技术为什么一定要高温,为何不用普通DNA
聚合酶
?如何进行循环的?引 ...
答:
③引物的适温
延伸
:DNA模板--引物结合物在TaqDNA
聚合酶
的作用下,以dNTP为
反应
原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2...
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