多聚酶链式反应的反应原理

Question

如题所述

Answer 1

PCR用于扩增位于两端已知序列之间的DNA区段，即通过引物延伸而进行的重复双向DNA合成。基本原理及过程如下：
PCR循环过程中有三种不同的事件发生：（1）高温变性（2）低温复性（3）中温延伸
1． 高温变性 ：加热使模板DNA在高温下（90-95℃ ）变性，双链间的氢键断裂而形成两条单链。
2． 低温复性：在体系温度降至55-60℃ ，模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合，使引物与模板链3’端结合，形成部分双链DNA。
3． 中温延伸：体系反应温度升至70-75℃ ，热稳定DNA聚合酶以单链DNA为模板，在引物的引导下和Taq酶的催化下，利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸（dNTP），按5’到3’方向复制出互补DNA。
上述3步为一个循环，即高温变性、低温复性、中温延伸 3个阶段。从理论上讲，每经过一个循环，样本中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可成为新一轮循环的模板，经过25～30个循环后DNA可扩增106～109倍(应该是十的六次方至十的九次方，是百度无法打出科学计数法，因此写成了106~109）。
典型的PCR反应体系由如下组分组成：DNA模板、反应缓冲液、dNTP、MgCl2、两条合成的DNA引物、耐热DNA Taq聚合酶（　Taq酶是从水生栖热菌 Thermus Aquaticus （ Taq ）中分离出的具有热稳定性的DNA 聚合酶。 对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。 ）。

Answer 2