基因-高中生物

dna链接酶必须作用到dna双链上的二脂键,dna聚合酶必须作用到单链上的二酯键,对否?
T4DNA连接酶能不能连接两段单链?

··DNA连接酶是把成段DNA连起来,在高中好像只出现在生物选修3里头,基因工程目的基因导入质粒时,先用基因剪刀(限制性核糖内切酶)将目的基因“剪”下来再连接。而高中生物没有说必须双链。即DNA连接酶作用的是,使相邻脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键!这种作用的发挥,不依赖于双链的存在!
··而DNA聚合酶则是DNA复制时(包括自然复制和PCR过程)才用。

体外连接:目前已知有三种方法可以用来在体外连接DNA片段:
第一种方法是,用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段;
第二种方法是,用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来,或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly(dA)-poly(dT)尾巴之后,再用DNA连接酶将它们连接起来;
第三种方法是,先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头,使之形成粘性末端之后,再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异,但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。
粘性末端DNA片段的连接
DNA连接酶最突出的特点是,它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用,形成重组的DNA分子。
平末端DNA片段的连接
常用的平末端DNA片段连接法,主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。
同聚物加尾法
这种方法的核心部分是,利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶,它能够将核苷酸(通过脱氧核苷三磷酸前体)加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA,以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中,DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段,称之为poly(dA)尾巴(图2-7)。反过来,如果在反应混合物中加入的是dTTP,那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly(dT)尾巴。因此任何两条DNA分子,只要分别获得poly(dA)和poly(dT)尾巴,就会彼此连接起来。这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法(homopolymertail-joining),简称同聚物加尾法。
衔接物连接法
所谓衔接物(linker),是指用化学方法合成的一段由10~12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端,用多核苷酸激酶处理使之磷酸化,然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子,这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法,将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。
DNA接头连接法
DNA接头,是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后,便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子,而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造,可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。
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第1个回答  2013-05-19
对。
dna链接酶和dna聚合酶都是作用于磷酸二酯键。但目前发现的dna链接酶都只能作用于双链DNA,而dna聚合酶只能聚合一条单链的形成。
希望对你有帮助~
补充:T4DNA连接酶也不能连接单链,T4DNA连接酶和E.coliDNA连接酶都是只能连接双链DNA。本回答被提问者和网友采纳
第2个回答  2013-05-18
对 DNA 连接酶是吧两个DNA 片段连接到一起(磷酸二脂键) 聚合酶 合成DNA链必须要有一小段引物,因为他不能从头合成 必须从5撇到3撇(磷酸二脂键)
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