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为什么碱性磷酸酶处理可以防止质粒载体DNA自连的作用
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推荐答案 推荐于2017-12-16
碱性磷酸酶
可以去除DNA断裂处的5'端的磷酸基团。
5'端的磷酸基团对于DNA连接是必须的，用碱性磷酸酶处理切开的载体后，载体不能在
DNA连接酶
的作用下自连，而目的基因片段两端是有5'端的磷酸基团的，可以在DNA连接酶的作用下与载体连接。
所以碱性磷酸酶处理可以防止质粒载体DNA自连的作用。
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为什么碱性磷酸酶处理可以防止质粒载体DNA自连的作用
答：
DNA连接需要自由的磷酸和羟基反映，去磷酸化后载体的末端都没有磷酸就不能连接了
。而连接片段时，由片段上提供磷酸，所以还能连接
为什么碱性磷酸酶处理可以防止质粒载体DNA自连的作用
答：
而碱性磷酸能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端
。这样就不会发生缩合反应，防止自连的发生。
CIP buffer在
DNA
片段的
连接
反应中
的作用
答：
碱性磷酸酶 (CIP)能催化除去DNA、RNA、三磷酸核糖核苷和三磷酸脱氧核糖核苷的5′磷酸基团
。由于CIP处理后的DNA片段缺少连接酶所要求的5′磷酸末端，因此它们不能进行自连接。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。
如何
避免载体自连
现象
答：
碱性磷酸酶处理
切开的
载体
~可减少
自连的
产生~再一点双酶切要充分~可先做一个小切的预实验~
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