高中粗鉴定:用吡罗红（DNA）和甲基绿（RNA）鉴定.
DNA的鉴定
(1)配制二苯胺试剂:取0.1 mL B液;滴入到10 mL A液中,混匀.
(2)鉴定:取4 mL DNA提取液放入试管中,加入4 mL二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝).用沸水浴(100℃)加热10 min.在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色).
附1:研磨液的配制方法
Tris:10.1 g(
相对分子质量为121.4),先加50 mL
蒸馏水溶解,用
物质的量浓度为2 mol/L的盐酸调至pH=8.0,再加下述药品.
NaCl:8.76 g(相对分子质量58.44)
EDTA:37.2 g(相对分子质量372.24)
SDS:20 g(相对分子质量288.3)
待上述药品全部溶解后,再用蒸馏水定溶至1000 mL.
若在室温低于20℃时配制药液,SDS呈沉淀析出,此时需要加温,才能将SDS溶解.如果提前配制的研磨液出现了沉淀,则应加温使沉淀溶解后再使用.
附2:研磨液中几种药品的作用
SDS(
十二烷基磺酸钠):可使蛋白质变性,与DNA分离.
EDTA(
乙二胺四乙酸二钠):为DNA酶的抑制剂,可以防止细胞破碎后DNA酶降解DNA.
物质的量浓度为0.15 mol/L的
氯化钠溶液:能很好地溶解DNA.
Tris/HCl:提供缓冲体系,DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态.(Tris为
三羟甲基氨基甲烷)
RNA的鉴定
取RNA沉淀约O.2 g，加2 ml 10％H2SO4→沸水浴中加热2 min→加1.5 ml地衣酚试剂→沸水浴中加热→观察颜色变化。