tris缓冲液是怎么配制的?

如题所述

tris-hcl缓冲液的配置方法为:若要配制1LpH为8.0的1mol/LTris-HCl母液(M=121g/mol),首先加入121gTris到1L烧杯中,加入600mL超纯水溶解后,用浓盐酸调节pH至8.0左右,然后加水定容至1L。

一、tris-hcl缓冲液优点:

1、碱性强,只需要这一种缓冲体系就可以配制从酸性到碱性的大pH范围缓冲液。

2、对生物化学过程干扰很小,不与钙镁离子及重金属离子反应。

二、tris-hcl缓冲液缺点:

1、缓冲液的pH受溶液浓度影响较大,缓冲液稀释10倍,pH变化大于0.1。

2、温度变化对缓冲液影响很大,例如4℃时配制的pH8、4缓冲液,在37℃时pH变为7.4,所以一定要在使用温度下配制。

3、易吸收空气中的二氧化碳,因此配好的缓冲液要盖严、密封。

4、对某些pH电极有一定的干扰作用,因此应使用Tris溶液兼容的电极进行检测。

5、Tris在一定程度上与各种分子发生反应,包括RNA酶抑制剂、醛、酶及常见的金属离子包括Cr3+,Fe3+,Ni2+,Co2+和Cu2+等,配制过程中应考虑与其他组分的相互作用。

6、吸入,摄入,皮肤吸收Tris可造成伤害,操作时需戴好手套和护目镜。

7、作为蛋白缓冲液时,若后续工作需要质谱,则不适宜用Tris,最好换成其他质谱仪可耐受的缓冲液。

Tris缓冲液的应用领域和用途

一、应用领域

分子生物学核酸及蛋白研究。

二、用途

Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂,还有许多重要用途。Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫(C. elegans)核纤层蛋白(lamin)的中间纤维的形成。

Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一,其在电泳缓冲液中与甘氨酸构成缓冲体系,稳定电泳过程中的pH。此外,Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。

Tris也被用作滴定标准物。作为蛋白缓冲液时,若后续工作需要质谱,则不适宜用Tris,最好换成其他质谱仪可耐受的缓冲液。

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第1个回答  2024-01-08

Tris缓冲液的配制方法主要有两种:

方法一:

    分别配制0.05 mol/L Tris和0.05 mol/L HCl溶液。

    按常用表中所列体积混合即可。

由于标准浓度的稀盐酸不易配制,所以常用另一种方法:

方法二:

    称量一定量的Tris碱。根据所需的pH值和缓冲液体积,计算所需的Tris碱的量,加入适量的去离子水,并搅拌至溶解。

    加入一定量的浓盐酸,调节pH值至所需的范围。浓盐酸的量也需要根据所需的pH值和缓冲液体积进行计算。

    补加水至所需的体积。

    将溶液密封保存于冰箱中,并定期检查其pH值是否发生变化。

需要注意的是,由于pH值受温度影响较大,因此在不同的温度下,pH值可能会有所不同。因此,在配制Tris-HCl缓冲液时,需要特别注意温度的影响,尽量保持恒温。同时,由于浓盐酸具有挥发性,因此在配制过程中需要注意通风和安全。此外,为了保持Tris-HCl缓冲液的稳定性,需要避免与金属离子接触,同时尽量减少微生物的污染。

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