底物浓度对酶促反应速度的影响的实验报告

Question

包括试验原理，要点，实验结果，结果分析

Answer 1

取50ml三角瓶3个，加入5ml甲醛与1滴酚酞，以0.1M标准NaOH滴定至微红色，3个瓶颜色应当一致，编号。

量取40g/L酪蛋白50ml，加入一150ml三角瓶，27℃保温10分钟，同时胰蛋白酶液也在37℃保温10分钟，然后吸取5ml酶液加到酪蛋白液中。（同时计时！）充分混合后立即取出10ml反应液（定为0时样品）加入一含甲醛的小三角瓶中（1号）加10滴酚酞；以0.1M NaOH滴定至微弱而持续的微红色。在接近终点时，按耗去的NaOHml数，每ml加一滴酚酞，在继续滴至终点，记下耗去的0.1M标准NaOH ml数。

在4分钟、8分钟时，分别取出10ml反应液，加入2号、3号小三角瓶，同上操作，记下耗去NaOH ml数。

以滴定度（即耗去的NaOH ml数）对时间作图，得一直线，其斜率即初速度为V40（相对于40g/L的酪蛋白浓度）。

然后分别量取30g/L、20g/L、10g/L的酪蛋白溶液，重复上述操作，分别测出V30、V20、V10。

利用上述结果， 即求出V与Km值。