PCR体系中各成分的作用以及程序的设计

如题所述

PCR主要组分包括:
双蒸水、引物、10X缓冲液、dNTP、模板和酶。

引物是与模板配对的十几二十个碱基,起始PCR的合成部位

10X缓冲液成分最为复杂,除水外一般包括四个有效成分:缓冲体系,一般使用HEPES或MOPS缓冲体系;一价阳离子,一般采用钾离子,但在特殊情况下也可使用铵根离子;二价阳离子,即镁离子,根据反应体系确定,除特殊情况外不需调整;辅助成分,常见的有DMSO、甘油等,主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构

dNTP是四种脱氧核苷酸,A、T、C、G,PCR扩增中用于合成DNA的原料

模板是待扩增的DNA序列

酶能够催化DNA序列的合成

PCR程序主要包括:
预变性:95-98度5min,双链DNA解旋形成单链
变性:95-98度 20-30s,双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA
退火:55-60度,30s,系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
延伸:72度,在酶的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端→5′端延伸,合成与模板互补的DNA链。
循环变性至延伸步骤30-35次
最后72度5min

其中变性温度与时间跟选用的酶相关,退火温度跟引物设计有关,延伸时间跟你扩增片段长度和选用酶相关。
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第1个回答  2013-09-30
这是什么电脑设计?不用理会我
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