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t4dna连接酶到底反应多长时间最佳
如题所述
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推荐答案 2017-10-10
t4dna连接酶反应4~6小时最佳。
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建立
连接反应
体系时需注意的问题
答：
通常情况下利用T4DNALigase必须经过长达16小时才能完成连接反应
,而且反应常常受到DNA末端结构等的影响。宝生物工程(大连)有限公司(TaKaRa)的DNA连接系统(TaKaRaDNALigationKitVer.2)由于其独特的反应液体系,可以将反应时间缩短至半个小时,且不受DNA结构等的影响,大大地节省了反应时间,方便了实验操作。此外,...
DNA连接酶
的分类
答：
有效期6个月
。10×LigationBuffer成分：Tris-HClpH7.8600mMMgCl215mMDTT100mMATP10mM连接条件推荐在10~20ml反应体系中进行接反应，反应中DNA浓度最大可达1mM（1kbDNA约1mg/ml）。首先混合要接的DNA片段，加入10×LigationBuffer至终浓度为1×，再加入适量T4DNALigase混匀。最适连接温度为16℃。粘末端连接...
影响
dna连接
效率的因素有哪些
答：
温度是影响DNA连接效率的主要因素。
连接酶的最佳反应温度是37℃
，但是在这个温度下，粘性末端之间退火形成的氢键结合是不稳定的。因此，连接粘性末端的最适温度一般认为4~16℃比较合适。平末端连接反应受温度的影响较小，连接反应的最适温度为10~20℃，一般可在室温下进行，但温度过高（>30℃）也会导致...
DNA连接
技术[操作]
答：
值得注意的是，实验中将2号管设置为对照，以检验V-DNA的酶切效果以及
T4 DNA连接酶
的连接效果。而现在，宝灵曼公司已经推出了便捷的快速DNA连接试剂盒，它集成了所有
反应
所需的试剂，能在室温下仅需5分钟就能完成粘性末端或平头末端片段的连接，大大简化了实验流程。
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