第1个回答 2012-01-05
细胞培养环境、设备、耗材与试剂
环境：细胞培养需要创造一个尽量无菌的环境，所以基本要求是一间密闭的带有空气净化系统的实验室。实验室要安装能够进行表面杀菌的紫外灯，一般装置在室内顶部，与日光灯分开控制。
设备：一般的细胞培养需要二氧化碳细胞培养箱，达到细胞实验操作要求的超净台，倒置显微镜，液氮罐，冰箱，水浴锅，离心机，微量移液器等。
耗材：基本的细胞实验耗材包括酒精灯、脱脂棉花、封口胶、细胞培养瓶、细胞培养皿、移液管、 50ml离心管等。耗材可以购买细胞培养专用的一次性耗材，也可使用长久性的玻璃器皿。但是如果是使用长久性的玻璃器皿，必须将其用牛皮纸包裹好，然后经过湿热高压灭菌和灭菌后烘干。牛皮纸在放进超净台时才能拆除。
试剂：根据培养的细胞种类的不同，需要的试剂也不同。基本要求包括培养的细胞对应的培养液，胎牛血清，L谷氨酸，双抗（青霉素和链霉素），0.25% 胰酶以及PBS。
试剂可以通过生物公司订购，其中双抗、胰酶和PBS也可以自行购买原料配制。1、配制双抗时要用灭过菌的双蒸水，用一次性无菌注射器进行配制，整个配制过程要在超净台内操作。
配制胰酶时要使用灭菌后的双蒸水，配制好可以用带0.22微米微孔滤膜的过滤器进行过滤灭菌，整个过滤灭菌过程要在超净台内操作。
配制PBS可以使用不灭菌的双蒸水，配制完成后再经过湿热灭菌。
部分试剂的配方
100×L谷氨酸：L谷氨酰胺0.2M
10×PBS：1000ml中含NaCl 8.5g，Na2HPO4.12H2O 30.8g，NaH2PO4.2H2O 2.8g
100×双抗：青霉素10000U/ml，链霉素10000ug/ml
胰酶：0.25%胰酶，0.03EDTA
细胞完全培养液的配置
细胞完全培养液，以293细胞为例，需要含10%胎牛血清、2mmol/L的L谷氨酸的DMEM培养液。
配置好的DMEM培养液，根据实验要求的不同，选择是否加入双抗。双抗终浓度为100单位/ml。