PCR鉴定微生物,请问一下具体的步骤是什么?

Question

请问比较16sRNA的方法是什么?

Answer 1

PCR即聚合酶链式反应是常用的快速扩增基因的方法。
通过PCR可以鉴定到种
具体步骤：
1将培养过的微生物（最好是青年时代的）提取基因组（这步不清楚再问我）
2 通过PCR扩增，
3 测定基因序列
4 和已知的基因图库上的序列比较，就可以确定是哪一个种
不过现在一般不采用基因组来比较，这样工程量太大。比较16SRNA是比较常用的方法。相对简单，准确度高。

Answer 2

简单的说就是提取基因组，然后用专门的特异性引物作PCR，得到大约1k多的产物，如果条带清洗，可以直接拿去测序，也可以作TA克隆以后测序，然后作序列比对，NCBI blast之类的

要看你所检验的时微生物的什么基因了
比如说是基因组还是mRNA还是16sRNA
基因组简单，直接提取基因组DNA作PCR就是了
其实更简单的做法是直接把细菌煮一下裂解，直接作PCR

如果要检验基因转录水平
就要提取mRNA，然后用逆转录酶逆转录出cDNA，然后再PCR
这时候通常要同时做比如说GAPDH的内参

16sRNA就是检验微生物物种所用的

Answer 3

1 PCR混合物制备，（根据你需要来），然后装管
2 常温随机挑选转化板上的转化子，枪头挑取菌体琼脂板上作单拷贝，（没枪头上牙签），再在刚才的管里洗一洗，板和馆配上号，不然做的多就乱了
3 扔pcr仪里，电泳找片段，有既是阳性克隆
4 建议用通用引物

Answer 4

先提取DNA,做PCR扩增,再测序
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说起来比较简单,但做比较复杂,,就不展开说了..