利福平在胃肠道中的吸收速度较快，正常成年人和儿童血峰浓度差异较大。空腹口服10mg/kg体重后，约2-4小时达到峰值10μg/mL，但与食物同服会降低其吸收效果。正常人服用600mg后，其半衰期约为3小时，增加剂量至900mg则延长至5.1小时。重复用药时，半衰期会缩短，平均值为2-3小时。与异烟肼合用时，利福平的半衰期可能缩短。利福平主要通过胆汁快速排出，且有肠肝循环，代谢物为去乙酰基代谢物，具有抗菌活性，大部分在6小时后以去乙酰基形式存在于胆汁中。约30%的利福平从尿液排出，其中一半为原型药物。本药分布广泛，有效浓度遍布全身各脏器和体液，蛋白结合率为80%，非结合药物以非离子化形式在组织中自由扩散。异烟肼在1-2小时达到血峰浓度，6小时内血药浓度下降少于50%。它广泛分布于全身体液和组织，可通过胎盘屏障，进入乳汁，乳汁中浓度与血药浓度相似。24小时内，约50%-70%的口服剂量通过尿液排出。异烟肼代谢主要通过乙酰化和水解，个体差异主要受遗传基因影响，黑人和欧洲人中约50%为慢代谢型，亚洲人多为快代谢型。大剂量口服异烟肼可能导致维生素B6缺乏，可能与脱色氨酸酶的竞争有关。研究显示，无论是单用或卫非宁形式组合，两种药物的生物利用度相似。在微生物学上，利福平和异烟肼都是具有杀菌效果的抗结核药，对快速生长的细胞外和细胞内结核杆菌均有效，特别是对生长缓慢和间歇生长的结核菌也有抗菌作用。异烟肼主要对繁殖期结核菌有效。
本品为抗结核药，是利福平和异烟肼的复方制剂。利福平对结核分枝杆菌和部分非结核分枝杆菌（包括麻风分枝杆菌等）在宿主细胞内外均有明显的杀菌作用。异烟肼对各型结核分枝杆菌都有高度选择性杀菌作用，对生长繁殖期结核分枝杆菌作用强，对静止期作用较弱且慢。两者合用可以加强抗菌活性，并减少耐药菌株的产生。利福平与依赖于DNA的RNA多聚酶的b亚单位牢固结合，抑制细菌RNA的合成，防止该酶与DNA连接，从而阻断RNA转录过程，使DNA和蛋白的合成停止。异烟肼的作用机制可能是抑制敏感细菌分枝菌酸的合成而使细胞壁破裂。