简述影响DNA电泳迁移率的因素。

Question

如题所述

Answer 1

【答案】：影响DNA迁移率的因素有：
(1)样品的物理性状：包括分子大小、电荷多少、颗粒形状和空间构型。电泳迁移率与颗粒的分子大小、介质黏度成反比；与颗粒所带电荷成正比。DNA分子的空间构型不同，即使分子量相同，其迁移率也不同，如质粒DNA存在超螺旋闭合环状(Ⅰ型)、单链开环(Ⅱ型)和线性(Ⅲ型)三种不同的构型，三者之间的泳动速率，一般为Ⅰ型＞Ⅲ型＞Ⅱ型。
(2)支持物介质：包括凝胶浓度与电渗作用。不同浓度的凝胶形成的分子筛网孔大小不同，可以分离不同分子量的核酸片段。电渗作用是指在电场中液体对于固体支持物的相对运动，电渗的方向与电泳的方向相反。
(3)电场强度：电泳场两极间单位支持物长度的电压降即为电场强度。电场强度越大，带电颗粒的泳动速度越快。
(4)电泳缓冲液：电泳缓冲液是电泳场中的导体，它的种类、pH及离子强度直接影响电泳的效率。电泳缓冲液的pH直接影响DNA的解离程度和所带电荷量。缓冲液的pH与DNA样品的等电点相距越远，样品所带电荷量越多，泳动速度越快。DNA电泳缓冲液常采用偏碱性或中性条件，使核酸分子带负电荷，向正极泳动。缓冲液的离子强度与泳动速度成反比，电泳的最适离子强度为0.02～0.2。
(5)电泳温度。
(6)嵌入染料的存在。