第1个回答 2008-09-22
一、实验目的
1.了解配制培养基的原理,并掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2.学习几种常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法.
3.进一步熟练掌握手提式高压蒸汽灭菌锅的使用方法。
二、实验器材
1.药品及试剂:
可溶性淀粉,KNO3,K2HPO4·3H2O,MgSO4·7H2O,FeSO4·7H2O,1mol/L NaOH,琼脂,牛肉膏,蛋白胨,NaCl
2.仪器及其它
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸(5.5-9.0) 、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、干燥箱、培养皿、涂布棒、吸管(1ml)、玻璃珠、PH试纸
三、实验内容
1.分组配制高氏一号培养基300ml。
配方:
可溶性淀粉20g NaCl 0.5g KNO3 1g
K2HPO4·3H2O 0.5g MgSO4·7H2O 0.5g
FeSO4·7H2O 0.01g 琼脂 15-25g
水 1000ml pH 7.4-7.6
2.配制牛肉膏蛋白胨培养基
配方:
牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl 5g 水1000ml PH 7.4-7.6
3.每组制备玻璃珠无菌水(45ml)三角瓶2个。
4.每组制备无菌水试管(4.5ml/管)10支。
5.每组包9cm培养皿24套,6套为一包。
6.每组包1ml吸管5支,玻璃刮铲4个。
四、方法步骤
(一)培养基的制备与分装
1.称量 按培养基配方比例依次准确地称取药品。可溶性淀粉先用少量热水溶化后再加入其他成份,补足所需水分,混匀后加入琼脂。
2.熔化 在沸水浴锅中加热熔化。
3.调pH 用1mol/L NaOH调pH至7.4-7.6。
4.过滤 趁热用多层纱布过滤(本实验勿需过滤)
5.分装 将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上,装试管时,注意管口不要沾上培养基。液体分装装量不超过试管的1/4,固体分装装量不超过试管的1/5,分装三角瓶的量不超过三角瓶容积的一半,半固体分装装量为试管的1/3,灭菌后垂直待凝。
6.加棉塞 培养基分装完毕后,在试管口或三角瓶口塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能,然后包扎一层牛皮纸。试管应先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮纸,贴上标签,注明培养基名称、日期、组别。
(二)无菌水的制备
7.用量筒量取45ml水于带玻璃珠三角瓶中,塞上棉塞,包扎牛皮纸。
8.用5ml吸管取4.5ml水于试管中,塞上棉塞,包扎牛皮纸。
(三)器皿的准备
9.培养皿的包装 每6套一包,用旧报纸包扎(或放在特制铁皮圆筒里,加盖扣严)。
10.吸管的包装 首先在吸管的上端塞上一小段棉花,用长纸条包扎、打结。
11.玻璃涂布棒的包装方法同吸管的包装。
(四)培养基、无菌水、器皿的灭菌
12.将培养基、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内,1.05kg/cm2压力,121.3℃,20min湿热灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。
13.灭菌完毕,将试管培养基冷至50℃左右,将试管棉塞搁在玻棒(或木棍)上,搁成斜面,搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。
14.将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24~48h,以检查灭菌是否彻底。
15.器皿放入干热灭菌箱内,加热灭菌。