为什么要用限制酶取一段基因，又在运载体（如质粒）上截去一段基因？
这个问法其实有问题。并没有在运载体上面截取基因，只是特异的剪出一个粘性末端，然后同样的酶获得相应的目的基因。然后通过碱基互补配对原则使他们相连。
怎么能肯定它能表达呢？
其实实验的成功率很低，并不能肯定这段基因一定能表达，所以需要在导入之后做检验。（如果是微生物的话，用特异培养基培养。比如导入抗青霉素基因，就在培养基里面加入青霉素基因，筛选出有此基因的微生物）
如果在原本质粒的基因处切断，那不就破坏它的基因了吗？
把原本质粒上控制这段性状基因切断可能会破坏基因——即切断的位置在此基因中间。但是可以通过选择特异的限制酶，从非基因处切断，添入我们所需要的基因。（质粒上并不是每个碱基对都表达，有内含子不被表达的，这个和染色体类似）
追问首先谢谢你的回答。在你说的“从非基因处切断，添入我们所需要的基因”那按理论来说，应该就不能表达而不是成功率低了。请问这又是怎么回事？
追答在你说的“从非基因处切断，添入我们所需要的基因”那按理论来说，应该就不能表达而不是成功率低了。
基因是在质粒上不连续排列的，往往有特异的启动子和终止子。表达是并不是看所谓的存在“基因”的区段来表示，而是找到启动子，表达其后的信息，然后遇到终止子，结束表达。所以“从非基因处切断，添入我们所需要的基因”，不影响表达。
（其实我不太明白你那里不明白，或者可以再问得清楚点？）
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