柱层析总的原理,就是让目标蛋白结合在层析填料(树脂)上,然后通过特定的缓冲液将其洗脱下来,以达到纯化的效果。具体几种分类稍微归纳了下给你参考
免疫亲和层析
原理:亲和色谱分离蛋白以一个蛋白与特异性配基配对到色谱基质上,且蛋白质与配基间具有可逆的相互作用作为基础。目标蛋白与配基之间的生物学相互作用,可以是由于静电学的相互作用或是分子间疏水的相互作用,也可以是范德华力或氢键结合力产生的。
影响因素:主要是亲和标签的完整程度,缓冲液的组分。
离子交换层析
原理:离子交换对分子的分离是基于它们表面净电荷的差异。以蛋白质为例,它由许多包含弱酸弱碱集团的不同氨基酸组成。它们表面的净电荷会随着周围环境的pH值改变而改变。对某一特定蛋白质来说,其表面净电荷与pH之间的相对关系是独特的,而离子交换层析正是利用了这一特点来完成对不同蛋白质的分离。
影响因素:主要是缓冲液的pH值,盐浓度。
疏水相互作用层析
原理:疏水层析根据蛋白表面疏水性的不同,利用蛋白质与疏水层析介质疏表面可逆的相互作用来分离蛋白。纯水状态下,任何疏水作用都太弱而不能导致配基与蛋白之间的相互作用。某些盐却可以增强疏水相互作用。高浓度的盐会增强相互作用,而低浓度的盐会降低相互作用。但是目前尚无被广泛接受的关于疏水相互作用层析机制的理论。
影响因素:环境温度,盐浓度。
凝胶过滤层析
凝胶过滤根据分子通过凝胶填料大小不同对其进行分离。以蛋白质为例,因为分子不与凝胶填料结合,故缓冲液成分不会直接影响分辨率。
影响因素:蛋白质分子量。
温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考