引领前沿科技的荧光标记Apta-NASBA：多色病原体检测的新突破
上海前迪生物科技公司近日推出了创新的Apta-NASBA技术，这款高灵敏度、多功能荧光病原体检测方法凭借其等温、无细胞合成生物学技术，实现了惊人的1 pM检测限，无疑为实时检测领域带来了革命性的突破。相较于传统的PCR，Apta-NASBA简化了实验流程，降低了设备成本，兼容性极强，不仅适用于荧光微孔板，甚至能与qPCR或3D打印平台如Raspberry Pi无缝对接，为现场诊断提供了前所未有的便利性。
文章中提到，Apta-NASBA采用编码荧光适配体的引物，针对aggR基因进行设计，aggR基因编码粘附菌毛的转录激活因子。虽然荧光适配体引物能够实现指数级扩增，但非模板介导的假阳性问题曾是个挑战。研究者们通过抑制T7 RNA聚合酶的非典型活性，引入抑制剂如Duplex40和Duplex100，有效控制了假阳性。实验中，他们精细调整了抑制剂浓度与长度，以及Mg2+浓度对转录的影响，最终将检测限降至1 pM，确保了结果的准确性。
为了提升检测的多样性和特异性，Apta NASBA引入了黄色和红色荧光标记的适配体Corn和孔雀绿，用于同时检测estP（玉米）和estH（西兰花）等病原体。通过设计针对这些基因的正交引物，Apta NASBA确保了每一个检测目标的精确匹配。该技术的等温特性使得设备需求大幅度降低，甚至可以与手机摄像头模块结合，让现场诊断变得更加便捷和经济。
在材料和方法部分，研究者们详细描述了实验步骤，如使用RNAP、mMuLV逆转录酶、RNase H和牛血清白蛋白酶的混合物进行反应，酶浓度经过精心优化。反应过程包括预热、酶催化、转录产物的纯化，以及通过体外转录模板进行荧光检测的标准化。酶的高效表达和纯化则通过大肠杆菌系统实现，而酶活性的验证则依赖于适体的体外转录或基因逆转录实验。
在实验操作中，通过37°C下的RNA沉淀、尿素PAGE凝胶分离和荧光检测，确保了样品的精确处理。为了消除背景干扰，研究人员对凝胶进行物理处理和乙醇沉淀，同时通过SYBR Gold染色，清晰地展示了未折叠序列。Apta-NASBA不仅在偏远地区具有广阔的应用前景，而且它的可扩展性预示着未来在多种RNA检测，包括功能性RNA分析中的巨大潜力。