前后两次纯化出蛋白的分子量略有差别是什么原因

Question

如题所述

Answer 1

当在前后两次纯化过程中得到的蛋白分子量出现略有差别时，可能的原因有：
1.蛋白降解：
长时间或不适当的储存、处理条件可能导致蛋白部分降解，从而导致测得的分子量减小。
2.实验条件：
轻微的实验条件变化，例如pH、盐度、洗脱缓冲液的组成、温度等，都可能影响蛋白质的结构和随后的迁移行为，例如电泳缓冲液的制备、样品的处理、凝胶的选择等，可能导致蛋白在电泳时的迁移性发生变化。
如果你是通过SDS-PAGE来确定蛋白质的分子量，需要注意的是凝胶的浓度、孔隙大小、SDS的浓度、甚至电流的强度和电泳时间都可能影响蛋白质的迁移率。
3.样本加载量和纯度：
不同的样本纯度和浓度可能会影响SDS-PAGE结果，因为过度加载的蛋白质可能会导致迁移异常。
5.设备误差：
使用的仪器可能存在校准不准确或其他误差，从而导致测定结果出现偏差。

Answer 2

分子量有差别是SDS-PAGE上的表观分子量有差别？
首先要检查跑胶是否有影响，是不是两次电泳的胶配制的有偏差造成。把两次纯化的样品跑在同一块胶上去验证其分子量是否有差距。（如果肉眼难以判断的可以降低上样量把两个样品混合后上在同一个泳道去观察）
排除掉电泳的原因后，可以去检查两次纯化过程是否一致，一般如果是tag的蛋白用亲和柱纯化出来都不会有差别。如果是无tag的蛋白可能会因为表达有点差异。
如果两次纯化条件是没有偏差的那么就要去检查下诱导表达时是否会有影响。

正常来说，SDS-PAGE造成偏差的可能性最大。本回答被网友采纳