CCK-8实验原理是通过检测还原性的代谢活动来间接反映细胞的增殖和存活能力。
在CCK-8实验中，首先需要将需要评估细胞活力的细胞培养在体外，并使其附着在培养皿上，形成一个细胞单层。然后，将不同浓度的药物溶液加入细胞培养基中，使其与细胞接触。在一定的时间内，药物会对细胞产生一定的影响，例如抑制细胞增殖、引起细胞死亡等。
为了评估细胞活力，CCK-8试剂被加入到培养基中，与细胞进行反应。CCK-8试剂中的四唑盐会与细胞代谢产物产生还原反应，生成一种可溶于水的形式。这种新生成的产物可以通过在450nm波长下测量其吸光度来确定。吸光度的变化与细胞的增殖和存活能力相关。测得的吸光度数值与细胞活力成正相关，数值越高表示细胞活力越强。
在进行CCK-8实验时，需要注意确保药物和CCK-8均匀分布在培养基中，避免影响脱氢酶活性的条件或化学物质对实验结果产生干扰。同时，加样孔中不要有气泡，以避免干扰OD值的测量。孵育时间因孔中细胞的类型和数量而异，需要根据实际情况进行选择。在读数之前，可以在摇床上轻柔震荡混匀，以确保测量结果的准确性。此外，为了排除边缘效应，可以对96孔板进行封边处理。
总之，CCK-8实验是一种基于还原性代谢活动的细胞增殖和存活能力评估方法。通过测量CCK-8试剂与细胞代谢产物反应生成的产物的吸光度，可以间接反映细胞的增殖和存活能力。这种方法具有操作简便、结果可靠等优点，在药物筛选、细胞毒性研究等领域得到广泛应用。
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