母牛配种后，若不再表现发情，则需要确定母牛是否妊娠。常用的方法有外部观察法、阴道检查法和直肠触诊法。
（1）外部观察法
观察母牛的外部变化和行为。当母牛配种后周期性的发情停止；母牛的采食量和饮水量逐渐增加；营养状况改善，毛色润泽，膘情变好。行为上发生明显的改变，如性情变得温驯、行动迟缓，常躲避角斗或追逐，放牧或驱赶运动时，常落在牛群之后。妊娠中后期腹围增大，右侧腹壁突出，可触到或看到胎动。初产母牛乳房发育加快，妊娠4～5个月后乳房体积明显增大。外部观察法虽然简单易行，但一般不能进行早期妊娠诊断且准确率差。
（2）阴道检查法
根据阴道黏膜色泽、黏液分泌及子宫颈状态等确定母牛是否妊娠，该法常作为母牛妊娠诊断的辅助方法。
正常情况下，母牛妊娠3周后，阴道黏膜由未孕时的淡粉红色变为苍白色，没有光泽，表面干燥。当开膣器插入阴道时，阻力明显，有干涩感，同时阴道收缩变紧。阴道黏液的变化较为明显，妊娠40～60天，子宫颈口附近有少量黏稠黏液，3～4个月，黏液量增多变为浓稠、灰白或灰黄，形如糨糊。妊娠母牛的子宫颈口偏向一侧，呈闭锁状态，有糨糊状灰暗的黏液块堵塞于子宫颈口，称为子宫颈塞（栓），保护胎儿免遭外界病菌的侵入。子宫栓在分娩或流产前溶解，并呈线状流出体外。
（3）直肠触诊法
用手隔着直肠触摸卵巢、子宫、胎儿和胎膜的变化情况，并由此判断牛的妊娠。该法应用也较普遍，对于牛早期的妊娠诊断比较准确。
妊娠早期的直肠检查主要根据子宫角和卵巢黄体的变化进行判断，后期的直肠检查主要根据子宫中动脉特异脉搏等的变化和胎儿的存在进行判断。生殖器官的变化随妊娠时间的不同而有所侧重。牛妊娠不同月份直肠检查情况见表24。
表24 母牛妊娠不同月份直肠检查情况
早期的胚胎比较脆弱，胎儿和子宫的联系也正在建立之中，故操作时必须细心、轻柔，避免鲁莽而造成妊娠母牛的流产。
奶牛的妊娠诊断除上述几种方法外，还有超声波诊断，乳汁和血液孕酮分析法等。配种后22～24天可采用放射免疫和酶联免疫进行早期妊娠诊断；配种后30～60天可采用超声波进行妊娠诊断。一般在配种后60～90天采用直肠检查法进行妊娠诊断。有条件时可在配种后4～5个月检查一次，掌握妊娠情况；停奶前（大约7个月时）再检查一次，防止漏检牛或流产牛停奶。