进行PCR实验时应注意哪些事项？

Question

就是实验过程中（从混样到最后电泳检测）各步骤应注意什么？或者操作技巧

Answer 1

首先，要确定你的模板DNA的浓度大概是多少，太稀和太浓都影响PCR结果，具体数据不记得了，只是我自己跑PCR时因为浓度问题失败了很多次，通过多次调整浓度才得到较理想的结果。
其次，如果是自己提的DNA，要确保模板中没有酒精（提DNA最后一步，一定要等酒精挥发完才能加TE）
最重要的是要探索一个好的退火温度，退火温度的高低可以以0.5℃的梯度变化确定，假如参考值为61℃，先跑一次，看结果，如果拖尾很长，则一个一个梯度增加退火温度，但不能增得太急，我那时次增加5℃，结果跑出来全是很小很小的片段，大概都只有300bp了。
这是我跑PCR的一些经验，仅供参考

Answer 2

1 尽量保证核酸纯净并控制浓度：浓度太低模板量不足，浓度太高杂质含量也就高，易影响Taq酶活性
2 操作尽量在冰上，传说Taq酶比较脆弱
3 据说加点BSA可以减少引物二聚体的形成并保护Taq酶的活性

PCR还是很拼人品啊，毕设那会儿死活P不出来，急死都没用。。