原理:RT-PCR 为反转录RCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real timePCR)共同的缩写.
逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR),是
聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为
互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增.
步骤:(一)预变性:
破坏DNA中可能存在的较难破坏的二级结构.使DNA充分变性,减少DNA 复杂结构对扩增的影响,以利于
引物更好的和模板结合,特别是对于
基因组来源的DNA模板,最好不要吝啬这个步骤.此外,在一些使用热启动
Taq酶的反应中,还可激活Taq酶,从而使PCR反应得以顺利进行.
(二)变性--退火--延伸循环:
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经
PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链.(三)PCR仪扩增循环后72度延伸10分钟。
追问你回答得很仔细,我想请问一下国内有哪家做PCR试剂是做的比较好的。听人家说广州的往圣科技做的不错。