我看了下参考文献,一种是无机盐培养基 ,还有一种是牛肉膏蛋白胨的培养基 ,我该用哪种?提取酶液时我用0.1mol/L盐酸胍,2%体积分数TritonX一100能行吗?灭菌方法可以用紫外吗?不用高温高压的话。
追答这两种培养基各有所长,无机盐培养基+农药(唯一碳源)可以避免染杂菌,只要能生长肯定要降解农药,但是菌体生长较慢;牛肉膏蛋白胨(肉汤)培养基营养丰富,菌体生长很快,但是不一定对降解酶的表达有利,不同的菌种性质也不同,有些可能不利于农药降解基因的表达,有些还可以,总之,这种培养基有利于大量收获菌体。你不妨在无机盐培养基中加入少量肉汤培养基,比如加入5%,灭菌后加入农药,并接种降解菌,这样少量的肉汤营养物先让菌体繁殖起来,营养也就消耗差不多了,再就开始利用农药了,也诱导了降解酶基因的表达,兼顾两种培养基的优点。文献上的缓冲液可以试试,磷酸盐缓冲液比较常用,主要是要考虑酶在缓冲液中能较好地保持活性。灭菌时培养基还是高温高压灭菌比较保险,农药可以单独灭菌(比如紫外)。估计你是考虑农药高温高压容易挥发或变性。
追问能加下您的QQ吗?还有几个小问题想请教下您,请问下,做单因素实验,有机磷农药降解菌酶效果的单因素实验,步骤是一定浓度的农药分成三组,滴入酶液,然后调PH值、和温度、然后需要等多久才能测定呢?还能做什么单因素?麻烦您了。
追答我不用QQ,中过几次毒不用了。酶活实验条件优化,最好连续取样,调查不同时间的降解率,然后你就可以知道多久测定了。一般情况下,时间太长,酶的活性会下降。其他因素,比如:重金属对酶的抑制,农药助剂对酶活的影响,等。你可以留个邮箱,我可以邮件回复你。
追问我的邮箱是[email protected] 请问下具体可以做哪些单因素变量实验。PH值和温度能作为单因素的变量吗?